Bacteriófagos para control de STEC: frecuencia de aislamiento a partir de distintas muestras

Abstract

Escherichia coli productora de toxina Shiga (STEC) es un patógeno alimentario emergente a nivel mundial y los bovinos son su principal reservorio. Los bacteriófagos son virus con alta especificidad por su hospedador bacteriano y dependen del mismo para replicarse. En la actualidad, la posibilidad de usar bacteriófagos para reducir la concentración de bacterias patógenas en distintos alimentos ha cobrado un mayor interés. Dado que siguen rutas de diseminación en el medio ambiente similares a las de sus hospedadores, la regla general es buscarlos donde se encuentra el patógeno. Por ello y dentro del objetivo general de aislar bacteriófagos líticos para STEC, en el presente trabajo se evaluó la frecuencia de aislamiento de los mismos a partir de muestras de materia fecal, bebederos y efluentes obtenidas en establecimientos ganaderos, y de muestras de carne picada adquiridas en carnicerías. Se tomaron un total de 37 muestras: 8 provenientes de diferentes carnicerías y 29 provenientes de tres tambos y un establecimiento de recría/engorde. Las muestras se pre-incubaron (individualmente o en pooles en el caso de las muestras de materia fecal bovina) ON a 37°C en caldo LB suplementado con CaCl2. Luego de tratarlas con cloroformo y centrifugarlas, los sobrenadantes se ensayaron sobre 9 cepas STEC (serogrupos O103, O145, O157, O26, O111) mediante la técnica de spot test. A partir de las muestras que mostraron efecto lítico, se purificaron los fagos empleando el método de doble capa de agar hasta la obtención de placas de lisis uniformes en cuanto a tamaño y morfología. Los sobrenadantes obtenidos a partir de las muestras de carne picada mostraron efecto lítico sobre las cepas STEC de los serogrupos evaluados, aunque con variabilidad en grado de turbidez. Dos de ellos mostraron un mayor efecto lítico sobre cepas STEC de los serogrupos O145, O157 y O26. A pesar de ello, no pudieron aislarse bacteriófagos debido a que no se pudieron recuperar durante los pasos de purificación o produjeron placas de lisis turbias y consecuentemente fueron descartados. Por otra parte, los sobrenadantes de las muestras obtenidas en establecimientos ganaderos mostraron mayor efecto lítico sobre la totalidad de los serogrupos testeados (al menos un sobrenadante para cada serogrupo). Notablemente, se pudo aislar una gran cantidad de fagos (16) del total de tambos y establecimientos de recría/engorde. Los mismos fueron capaces de formar placas de lisis traslúcidas y en su conjunto tienen efecto sobre todos los serogrupos STEC. A partir del análisis de los resultados se observa que las muestras obtenidas de los establecimientos ganaderos ofrecen una mayor frecuencia de aislamiento de fagos efectivos contra STEC, en comparación a las muestras de origen cárnico de las cuales no se logró aislar ninguno. Consideramos que, además de las características propias de la matriz de cada tipo de muestra, los tratamientos que se llevan a cabo en la industria cárnica con el objetivo de disminuir la carga bacteriana podrían influir en el número de fagos presentes en las muestras de carne picada.