Detección de fagos codificantes de verotoxinas en cepas de Escherichia coli aisladas de alimentos

Abstract

Introducción. E. coli productores de verotoxinas (VTEC) son patógenos alimentarios emergentes que pueden causar diarrea y severas enfermedades, como colitis hemorrágica y síndrome urémico hemolítico (SUH). El SUH es considerado una enfermedad transmitida por alimentos, de gran impacto a nivel de la Salud Pública y de la industria. Las verotoxinas producidas por las cepas VTEC están codificadas y reguladas por fagos insertos en el cromosoma bacteriano. En consecuencia, la inducción de estos fagos influye en la patogenicidad de VTEC y en la diseminación de las verotoxinas. Objetivo. Evaluar la presencia de fagos, y su inducción, en cepas VTEC aisladas de productos cárnicos. Materiales y métodos. Se estudiaron 10 cepas VTEC aisladas de alimentos cárnicos, previamente caracterizadas respecto a genotipo vt y serotipo. Cada cepa se cultivó durante toda la noche en caldo LB a 37 ºC, 120 rpm. Tres alícuotas de cada cultivo se inocularon en respectivos tubos con LB y se incubaron 1 hora a 180 rpm, 37°C. En este momento (H0) se agregó a uno de los tres tubos mitomicina C (0,5 µg/ml), a otro H2O2 (3 mM) y el tercero se dejó sin inductor. Los cultivos se incubaron a 37 °C, 100 rpm, 5 horas. Se construyeron curvas de crecimiento/lisis a través de la medición densidad óptica de los cultivos a 600 nm. Se realizaron ensayos en doble capa de ágar para la detección de fagos presentes en los sobrenadantes de cultivos a la hora 3 (H3), utilizando tres cepas derivadas de E coli K-12 como hospedadoras (DH5α, HB101 y Y1090). Se evaluó por PCR específica la presencia de fagos codificantes de verotoxina en placas de lisis. Resultados. Se observaron diferencias en las curvas de crecimiento/lisis entre las distintas cepas analizadas, y también ante la presencia de los distintos inductores. Sólo se observaron curvas correspondientes a patrones bacteriolíticos en cultivos de tres de las cepas estudiadas (HT 6-2, 5M y 41 M) en presencia de mitomicina C. Todos los cultivos en presencia de agua oxigenada mostraron una disminución en la velocidad de crecimiento, pero sin lisis evidente. Se detectaron placas de lisis visibles con los sobrenadantes de cultivo de tres cepas (HT 2-15, 41M y CM 20-7) inducidos con mitomicina C y usando DH5α como hospedadora, pero hubo diferencias en las otras condiciones de cultivo y cepas hospedadoras. Se detectaron placas de lisis correspondientes a fagos codificantes de vt por PCR. Conclusiones. En este estudio se observó que, a través de la detección de placas de lisis y confirmación por PCR, al menos 3 de las 10 cepas estudiadas, aisladas de alimentos cárnicos, presentaban fagos infectivos codificantes de VTEC. Además, dos aislamientos más presentarían fagos inducibles según las curvas de DO, que no pudieron ser detectados con las cepas hospedadoras utilizadas. Nuestros resultados destacan la presencia y el riesgo de liberación de fagos codificantes de VT por cepas VTEC presentes en alimentos cárnicos, los cuales podrían persistir en los mismos y llegar al hombre.