Mapeo de epitopes en la proteína principal del core del Virus de la leucosis bovina (BLV)

Abstract

El virus de la leucosis bovina (BLV) es un retrovirus que infecta naturalmente al bovino, siendo reconocido como el agente etiológico de la leucosis enzoótica bovina. Esta enfermedad está ampliamente diseminada en toda América, especialmente en establecimientos de producción lechera. Los datos más recientes en nuestro país (no publicados) indican una prevalencia de más de 90% de tambos infectados, con índices de infección superiores al 50% en la mayoría de los casos. Los animales infectados con BLV desarrollan anticuerpos (Acs) contra las principales proteínas estructurales del virus: la glicoproteína de la envoltura de 51kDa (gp51) y la proteína principal de la cápside de 24kDa (p24). Los test de diagnóstico generalmente detectan Acs anti-gp51, ya que alcanzan títulos superiores y generalmente aparecen antes que los Acs contra p24. Estudios previos muestran una alta correlación entre el título de anticuerpos anti-BLVp24 y la carga proviral, por lo que estos Acs son un buen marcador de carga proviral. El objetivo de este trabajo fue identificar epitopes reconocidos por linfocitos B en la proteína principal del core del BLV (BLVp24) y seleccionar herramientas útiles para el desarrollo de métodos serológicos precisos para dosar los Acs anti-p24 en animales infectados.La secuencia de la proteína fue obtenida de bases de datos (NCBI Reference Seq NP_777381.1). Esta secuencia se sometió a un análisis bioinformático (SEAL ?, desarrollado por Abmart, Inc. Shangai, China). Se asignó un score a cada residuo, teniendo en cuenta hidrofobicidad, características estructurales, exposición a solventes, entre otros criterios. Se identificaron 7 regiones con alto score y se obtuvieron 19 clones productores de Acs monoclonales contra los distintos péptidos.Se probó la reactividad de los Acs monoclonales contra la proteína BLVp24 producida en forma recombinante, mediante Western Blott. Tres de los 19 Acs probados mostraron fuerte reactividad contra la proteína BLVp24 recombinante, mientras que otros 4 Acs reaccionaron en forma débil, y los 12 restantes no reaccionaron. Los Acs que reaccionaron con mayor intensidad están dirigidos contra 2 de los 7 péptidos seleccionados, que se encuentran solapados en el extremo amino terminal de la proteína. Dos de los Acs que reaccionan en forma más débil reconocen una tercera región de la molécula. Los Acs que mostraron reacción en la técnica de Western Blott, también reaccionaron con la proteína adsorbida en placas de ELISA, siendo el nivel de reactividad proporcional al observado en Western Blott. Estos resultados nos han permitido seleccionar Acs monoclonales anti-BLVp24 y péptidos de la misma proteína para el diseño de futuros ensayos para la detección y/o cuantificación de Acs anti-BLVp24. Se estudiará la dominancia de los epitopes identificados por los Acs monoclonales que mostraron alto nivel de reactividad utilizando sueros de animales naturalmente infectados, y se evaluará su utilidad para el desarrollo de un ELISA de bloqueo. En caso de demostrarse su dominancia, los péptidos utilizados para desarrollar los Acm serían candidatos para ser utilizados como antígeno o trazador en una prueba de polarización de la fluorescencia.