Relación entre los niveles de expresión de stx 2a y la producción de fados en cepas de Escherichia Coli productor de toxina Shiga

Abstract

Escherichia coli productor de toxina Shiga (STEC) causa diarrea y graves enfermedades como colitis hemorrágica (CH) y síndrome urémico hemolítico (SUH) en humanos. Las toxinas Shiga (Stx) se encuentran codificadas en profagos, generalmente bajo el control de un promotor tardío y la proteína antiterminadora Q que regulan su expresión. Por lo tanto, la expresión y liberación de las toxinas se encuentran asociadas al ciclo lítico del fago. Existen distintos subtipos de Stx, entre los cuales el Stx2a es el que se asocia con mayor frecuencia a SUH.El objetivo de este trabajo fue evaluar si existe asociación entre los niveles de expresión de stx 2a y los niveles de producción de fagos, ambos en respuesta a la inducción con mitomicina C, de diversas cepas STEC nativas. Para ello se cuantificó por qPCR la expresión relativa basal e inducida de stx 2a y la cantidad de fagos producidos en cada condición. A partir de los resultados de expresión se calculó para cada cepa, mediante el método ΔΔCt, la expresión inducida relativa a la expresión basal de la misma cepa. Los niveles de producción de fagos se calcularon como el cociente entre las partículas del fagos liberadas por inducción con mitomicina C y las liberadas por inducción espontánea. Para analizar la correlación entre los niveles de expresión inducidos y los niveles de producción de fagos se calculó con el software InfoStat el coeficiente de Pearson. Se consideró estadísticamente significativo un p-valor ≤ 0.05. La producción de fagos también se evaluó por ensayos en doble capa de agar.Se estudiaron 20 cepas que correspondieron a los serotipos O26:H11, O91:H21, O145:H- y O157:H7, aisladas de bovinos, humanos y alimentos y con diferentes genotipos del gen q (q 933 solo o combinado con q 21 , o ausencia de ambos alelos). El coeficiente de Pearson obtenido no fue significativo. Sin embargo, se observó que los aislamientos que mostraron baja o nula expresión inducida, también mostraron baja o nula la producción de fagos por qPCR y no produjeron placas de lisis visibles. Asimismo, estas cepas eran las negativas para q 933 y q 21 .Si bien no se observó correlación entre los niveles de expresión de stx 2a y de producción de fagos, los resultados sugieren que características de los fagos influyen sobre estos niveles.