Efectos de lactoferrina in vivo e in vitro sobre parámetros reproductivos en ratas

Abstract

Lactoferrina (LF) está presente en el tracto reproductor femenino. La proteína es expresada y secretada por el tejido oviductal humano y puede unirse a las gametas. La presencia de LF fue capaz de reducir la interacción de gametas humanas y modular la función espermática in vitro. El objetivo de este estudio fue investigar el efecto de LF sobre parámetros reproductivos in vivo (tasas de nacimiento y preñez) e in vitro (tasa de fertilización in vitro -FIV-) en ratas Wistar. Ratas hembra (80 días) fueron asignadas aleatoriamente a uno de cuatro grupos de tratamiento y recibieron una inyección diaria durante el ciclo estral de 100 mg LF/kg (n=5), 200 mg LF/kg (n=5), 400 mg LF/kg (n=5) o 0,9% w/v cloruro de sodio (controles, n=7). En el día del proestro, a las ratas hembras tratadas se les permitió aparearse con un macho y se documentó el número de hembras preñadas y de crías nacidas de cada grupo. Se obtuvieron espermatozoides móviles de cauda epididimario de ratas macho (100-140 días). Se recuperaron ovocitos del oviducto de ratas (n=9) luego de la estimulación hormonal ovárica y los mismos fueron colocados en grupos de a 3 o 4 en gotas de 100 µl de medio HTF, inseminados con espermatozoides e incubados en ausencia (controles) o presencia de LF (100 μg/ml) a 37 ºC y 5% PCO2 por 24 hs. Después de la incubación, se evaluó el número de ovocitos fertilizados por tinción con Hoechst 33258 en un microscopio de fluorescencia y se estimó la tasa de fecundación in vitro. Los resultados indicaron que el 64% de los animales controles quedaron preñados. Ninguna de las ratas tratadas in vivo con 100 mg LF/kg resultó preñada mientras que los tratamientos con 200 mg y 400 mg LF/kg resultaron en 63% y 38% de animales preñados, respectivamente. La dosis de 100 mg LF/kg se asoció significativamente con la ausencia de preñez (p<0,05). La dosis de 200 mg LF/kg redujo significativamente el número de crías respecto de los controles (7,5  2,0 vs. 11,6  0,5, respectivamente p < 0,01). El número de crías observado con la dosis de 400 mg LF/kg (13,0  0,4) no difirió de los controles. La recuperación promedio de ovocitos de cada rata estimulada hormonalmente fue de: 17,2 ± 3,3 ovocitos/rata. La tinción fluorescente demostró que la presencia de LF disminuyó significativamente el promedio de la tasa de FIV respecto de controles (33,3 ± 8,5)% vs. (60,7 ± 6,6) %, respectivamente (n=9, p<0,05). Los datos sugieren que LF podría afectar el proceso de fecundación y la preñez en ratas, tal vez en forma dosis dependiente, dado que distintas dosis administradas in vivo causaron efectos distintos.