Aislamiento de Aspergillus sp. a partir de residuos de la industria aceitera y caracterización mediante abordaje polifásico

Abstract

La cáscara de girasol, es un residuo abundante de la industria aceitera en nuestro país, con un marcado impacto en el sudoeste de la provincia de Buenos Aires. En la actualidad, y en el marco de lograr una economía sustentable, existe un gran interés en la revalorización de este tipo de biomasa lignocelulósica. Una de las vías consiste en la utilización de microorganismos degradadores de estos sustratos para la producción de enzimas de interés industrial. En este contexto, previo a conocer la capacidad degradadora de los hongos filamentosos presentes en la cáscara de girasol, el objetivo de este trabajo fue aislarlos e identificarlos mediante caracterización morfo-fisiológica y técnicas moleculares. Para lograr la proliferación fúngica en el sustrato, la cáscara de girasol se incubó a 37°C hasta observar la aparición de micelio. Los aislamientos se realizaron en Agar Papa Dextrosa (PDA) a 25°C. Las características de la colonia y las estructuras microscópicas diagnósticas se estudiaron mediante observaciones de lupa y microscopía óptica tradicional, a partir de cultivos en placas con PDA incubadas a 20°C, y cultivos en Agar Extracto de Malta (MEA) y Agar Czapek Extracto de Levadura (CYA) incubados a 25 y 37°C. Para la identificación molecular se aisló ADN genómico a partir del micelio utilizando nitrógeno líquido. El ADN se purificó mediante un método tradicional utilizando mezcla Sevag cloroformo:alcohol isoamílico (24:1), etanol al 70%, e isopropanol frío. Se amplificaron las regiones ITS y calmodulina utilizando los primers V9G e ITS4, y CDM5 y CDM6 respectivamente. Para realizar el análisis filogenético se utilizó el método de máxima verosimilitud tomando secuencias a partir de estudios filogenéticos disponibles en la literatura. Los caracteres morfo-fisiológicos principales que determinaron la presencia de Aspergillus flavus fueron: las colonias verde amarillas, flocosas a algodonosas, de rápido crecimiento en todos los medios de cultivo testeados, con producción de esclerocios grandes (>800 µm diám.) en CYA a 25°C, conidióforos y conidios de paredes rugosas, conidios de hasta 6 µm diám. Esto fue confirmado por los estudios filogenéticos, donde la cepa aislada quedó incluida en el clado correspondiente a A. flavus, tanto en la filogenia de ITS como en la de calmodulina. En este trabajo se presenta el hallazgo y descripción de Aspergillus flavus, una especie capaz de producir enzimas degradadoras de sustratos lignocelulósicos, tanto aquellas que actúan sobre polisacáridos (celulasas, glucanasas y xilanasas), como las que degradan la lignina. Si bien varias especies del género Aspergillus son reconocidas por su capacidad degradadora de este tipo de sustratos, como A. niger, A. sclerotiorum, A. nidulans y, A. fumigatus, el rol en la degradación de la lignocelulosa por parte de A. flavus no ha sido tan documentada, y es lo que nos impulsa a continuar explorando su potencial para la degradación de este residuo tan abundante en nuestra región.