Efecto del agregado de EDTA al diluyente de Kenney para la refrigeración de semen asnal

Abstract

La situación de riesgo en la que se encuentra el asno a nivel mundial precisa la búsqueda de biotecnologías reproductivas que permitan aumentar el número y la variabilidad genética de los individuos de manera rápida; siendo la refrigeración de semen una herramienta que lo permita. Los diluyentes a base de leche descremada son utilizados usualmente para la refrigeración de semen de distintas especies. Sin embargo, la elevada concentración de calcio presente en los mismos afecta la vida media y capacidad fertilizante de los espermatozoides. El ácido etilendiaminotetraacético (EDTA) es un quelante de calcio que suele ser parte de diluyentes de congelación de semen. El objetivo de este estudio es evaluar el efecto del agregado de distintas concentraciones de EDTA al diluyente de Kenney suplementado con 2% de yema de huevo para la refrigeración de semen de asno. Se utilizaron dieciocho eyaculados de seis asnos Remonta Argentino (n=6, r= 3). Los eyaculados fueron diluidos en Kenney suplementado con: 2% yema de huevo (KY-0 EDTA); 2% yema de huevo y 1,5 mM EDTA (KY-1,5); 2% yema de huevo y 2,5 mM EDTA (KY-2,5); 2% yema de huevo y 4,5mM EDTA (KY-4,5). Las muestras se refrigeraron en Equitainer® durante 24 h, luego se trasladaron a una heladera a 5°C por un periodo total de 72 h, y se evaluaron cada 24h. La movilidad progresiva fue evaluada utilizando un Sistema CASA (Androvision™) mientras que la funcionalidad de membrana y presencia de acrosoma mediante la Técnica de HOS-Azul de Coomasie. Para el análisis estadístico se utilizó la prueba de Kruskal Wallis. En todos los tratamientos se observó una disminución de la movilidad total y progresiva a lo largo del tiempo, sin embargo, no se observaron diferencias entre los valores de motilidad total y progresiva entre las muestras evaluadas a las 24 y 48 h. Las muestras diluidas en KY-4,5 presentaron menor motilidad total y progresiva a las 48 h respecto a los otros tratamientos (p <.05). Los parámetros cinéticos VSL, VCL, VAP, ALH y BCF presentaron diferencias significativas en relación al tiempo de refrigeración, siendo más bajos a las 72h. Además, luego de 72h de refrigeración, el BCF fue significativamente mayor en las muestras diluidas con KY-0 y KY-2.5 (p<.05). El porcentaje de espermatozoides con membrana funcional y acrosoma intacto no presentó diferencias significativas entre los tratamientos (p >.05). Por lo tanto, el agregado de 1,5 mM y 2,5 mM EDTA al diluyente de Kenney para la refrigeración de semen de asno no afecta los parámetros de movilidad, funcionalidad de la membrana y estado acrosomal. Mientras que el agregado de 4,5 mM del quelante provoca una disminución significativa de los parámetros de movilidad comparado con los demás tratamientos. Como prueba de fertilidad se inseminaron dos grupos de yeguas utilizando semen refrigerado durante 48h. Un grupo de yeguas fue inseminado utilizando semen refrigerado por 48 hs en el diluyente KY-0, (control) y otro grupo se inseminó con semen refrigerado por 48 hs en el diluyente KY-2.5. No se observaron diferencias significativas en el porcentaje de preñez entre tratamientos: KY-0 60% (6/10) y KY-2,5 50% (5/10).