ALEJANDRA RAQUEL PAGANELLI

Datos académicos

Lugar de trabajo CONSEJO NACIONAL DE INVESTIGACIONES CIENTIFICAS Y TECNICAS / OFICINA DE COORDINACION ADMINISTRATIVA HOUSSAY / INSTITUTO DE BIOLOGIA CELULAR Y NEUROCIENCIA "PROFESOR EDUARDO DE ROBERTIS" | UNIVERSIDAD DE BUENOS AIRES / FACULTAD DE MEDICINA / INSTITUTO DE BIOLOGIA CELULAR Y NEUROCIENCIA "PROFESOR EDUARDO DE ROBERTIS"
Título Doctora de la Universidad de Buenos Aires, área Biología Molecular
Grado Universitario de posgrado/doctorado
Especialidad Los resultados preliminares mostraron que ante la estimulación de la retina durante 12 días, con una longitud de onda baja, Shh disminuye su expresión a diferencia de la tubulina acetilada del cilio primario que aumenta su expresión. Para una mejor comprensión de la función de la proteína de secreción Shh y del cilio primario en la retina de animales post-natales, seguiremos utilizando el modelo animal del pollo ya que guarda semejanza con la del humano. La luz visible es parte del espectro de radiación electromagnética y está compuesta por cuantos de energía de diferentes longitudes de onda y diferentes niveles de energía que los fotorreceptores captan gracias a las opsinas. Se correlacionó la estimulación lumínica con ondas de corta longitud de onda y alta energía (430 nm, luz azul) con degeneración de fotorreceptores. Se tienen escasos conocimientos sobre como la estimulación lumínica de alta energía afecta a la retina, pero se sabe que la luz azul afecta al epitelio pigmentario y a los fotorreceptores, fundamentalmente conos, produciendo daño fotoquímico. El recambio de las laminillas de los conos involucra al epitelio pigmentario, y la formación de nuevas laminillas. Dentro de la regulación fina de la formación de la retina se destaca el rol del morfógeno sonic hedhegog (Shh) el cual participa en la diferenciación y laminación de la retina y promueve la activación de las células de Müller como posible stem-cells de retina. El segmento externo del fotorreceptor, específicamente en este caso de los conos es una expansión de la membrana que contiene un cilio único no móvil. Este cilio participa en la formación de miles de sacos (bastones) o invaginaciones de la membrana plasmática las cuales forman estructuras similares a los discos de los bastones. Muchas de las afecciones del fotorreceptor recaen sobre este cilio primario. En una primera instancia se analizará el comportamiento biológico del cilio ante estimulación de los fotorreceptores con diferentes longitudes de onda, mediante inmunohistoquímica de tubulina acetilada, que se expresa en cilios primarios, en los días experimentales que aún no han sido analizados, calbindina y visinina, dos proteínas que se expresan en foterreceptores. Además se estudiarán estas proteínas por Western blot. Es muy importante el estudio del cilio primario, ya que la cascada de señalización de Shh ocurre en este lugar de la célula. También se continuará con el estudio de la función de Shh en retina adulta en los días experimentales que aún no han sido analizados. Para llevar a cabo estos experimentos, se pondrán pollos recién nacidos y 3, 6, 9 y 12 días post-eclosión en cajas con luces de diferente longitud de onda para estimular la retina. También se utilizará un modelo experimental de hipoestimulación. Para estos experimentos usaremos una misma longitud de onda pero con diferentes intensidades de iluminación, lo que permitirá estudiar el contraste lumínico. Los animales serán criados desde el nacimiento y por 2 semanas en un ciclo de 12 hs. de luz blanca con una intensidad de 200 lux y 12 hs. de oscuridad. Los grupos hipoestimulados estarán iluminados con luz blanca de 0,2 lux. Todos los grupos serán criados en cajas cuyas medidas son 60 x 60 x 60 cm. Las paredes y piso de éstas serán revestidos con papel vinílico blanco. Los lotes de animales son evaluados diariamente a fin de comprobar que todos crezcan con un ritmo similar y se controlará la ingesta de la comida. En todos los casos y para descartar posibles influencias de los ciclos diarios (ritmo circadiano) los animales serán sacrificados al finalizar el período de oscuridad y todos los lotes a la misma hora. Los pollos serán anestesiados y perfundidos por vía transcardíaca inicialmente con una solución Ringer 3 cloruros + heparina como solución lavadora y luego paraformaldehido 4% en buffer fosfato 0,1 Mm pH 7,4. Con el objeto de poder analizar las retinas al microscopio electrónico, en determinadas ocasiones se agregará al fijador 0,25% de glutaraldehido. Para analizar las retinas por IHQ, luego de la perfusión se enuclearán los ojos y se continuará la fijación por 2 horas más. Las retinas ya fijadas serán disecadas con el objeto de estudiar el área central de las mismas. Las diferentes técnicas de inmunohistoquímica que se realizarán sobre las retinas serán luego que éstas sean congeladas y cortadas en un crio-micrótomo de deslizamiento. La inmunotinción, sea inmunofluorescencia o DAB/níquel, se hará por la técnica de flotación y se visualizarán las diferentes proteínas mediante inmunofluorescencia convencional, de barrido láser o con diaminobencidina. Además, se analizará el ARNmensajero de Shh en las diferentes condiciones experimentales por la técnica de hibridización in situ no radiactiva en cortes de retina.

PRODUCCION CIENTÍFICO TECNOLÓGICA