Dinámica del citoesqueleto de actina de la célula hospedadora durante la infección con Coxiella burnetii

Abstract

Coxiella burnetii (Cb) es un patógeno intracelular obligado que emplea el citoesqueleto de actina, para su internalización y desarrollo dentro de la célula. En este trabajo se estudia el rol de proteínas asociadas a actina (RhoGDIα, miosina, LIMK 2, ezrina, CD44) en la internalización de Cb. La sobreexpresión de RhoGDIα (regulador de GTPasas Rho) produjo una disminución en los niveles de Cb internalizada, mientras que mutantes inactivas no tuvieron efecto. La inhibición farmacológica de MNMII (miosina no muscular II) interfirió en la internalización de Cb. La sobreexpresión, en células HeLa, de la forma salvaje y mutantes de LIMK 2 no produjeron cambios en la internalización. Por otro lado, el silenciamiento de ezrina o la sobreexpresión de mutantes negativas disminuyeron el ingreso de Cb a la célula hospedadora. Interesantemente, la transfección de su forma salvaje no modificó los porcentajes de internalización, mientras que su mutante fosfomimética incrementó los niveles de internalización de la bacteria e incluso los recuperó en células tratadas con el inhibidor de ROCK Y27632. El silenciamiento de CD44 produjo una disminución en la fagocitosis de C. burnetii, efecto que fue evitado al sobreexpresar una forma del receptor resistente al silenciamiento. Por otro lado, al sobreexpresar CD44 los porcentajes de internalización no fueron alterados. Sin embargo, los valores de Cb internalizada disminuyeron al sobreexpresar las mutantes dominantes negativas del receptor. En ninguno de los tratamientos previos se afectó la adherencia de Cb a la célula hospedadora. Nuestros resultados sugieren que CD44 participa en etapas tempranas de la internalización de C. burnetii. Además, en dicho proceso también intervendrían proteínas relacionadas a actina como RhoGDIα, ezrina y MNMII.