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dc.contributor.author
Muchut, Robertino José
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dc.contributor.author
Calloni, Rodrigo Daniel
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dc.contributor.author
Herrera, Fernando Enrique
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dc.contributor.author
Garay, Alberto Sergio
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dc.contributor.author
Arias, Diego Gustavo
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dc.contributor.author
Iglesias, Alberto Daniel
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dc.contributor.author
Guerrero, Sergio Adrian
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dc.date.available
2019-09-29T14:13:42Z
dc.date.issued
2018-11
dc.identifier.citation
Muchut, Robertino José; Calloni, Rodrigo Daniel; Herrera, Fernando Enrique; Garay, Alberto Sergio; Arias, Diego Gustavo; et al.; Elucidating paramylon and other carbohydrate metabolism in Euglena gracilis: Kinetic characterization, structure and cellular localization of UDP-glucose pyrophosphorylase; Elsevier France-editions Scientifiques Medicales Elsevier; Biochimie; 154; 11-2018; 176-186
dc.identifier.issn
0300-9084
dc.identifier.uri
http://hdl.handle.net/11336/84768
dc.description.abstract
Many oligo and polysaccharides (including paramylon) are critical in the Euglena gracilis life-cycle and they are synthesized by glycosyl transferases using UDP-glucose as a substrate. Herein, we report the molecular cloning of a gene putatively coding for a UDP-glucose pyrophosphorylase (EgrUDP-GlcPPase) in E. gracilis. After heterologous expression of the gene in Escherichia coli, the recombinant enzyme was characterized structural and functionally. Highly purified EgrUDP-GlcPPase exhibited a monomeric structure, able to catalyze synthesis of UDP-glucose with a Vmax of 3350 U.mg−1. Glucose-1P and UTP were the preferred substrates, although the enzyme also used (with lower catalytic efficiency) TTP, galactose-1P and mannose-1P. Oxidation by hydrogen peroxide inactivated the enzyme, an effect reversed by reduction with dithiothreitol or thioredoxin. The redox process would involve sulfenic acid formation, since no pair of the 7 cysteine residues is close enough in the 3D structure of the protein to form a disulfide bridge. Electrophoresis studies suggest that, after oxidation, the enzyme arranges in many enzymatically inactive structural conformations; which were also detected in vivo. Finally, confocal fluorescence microscopy provided evidence for a cytosolic (mainly in the flagellum) localization of the enzyme.
dc.format
application/pdf
dc.language.iso
eng
dc.publisher
Elsevier France-editions Scientifiques Medicales Elsevier
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dc.rights
info:eu-repo/semantics/openAccess
dc.rights.uri
https://creativecommons.org/licenses/by-nc-sa/2.5/ar/
dc.subject
CARBON STORAGE
dc.subject
EUGLENA GRACILIS
dc.subject
UDP-GLUCOSE
dc.subject
URIDYLYLTRANFERASE
dc.subject
Β-1,3-GLUCAN
dc.subject.classification
Bioquímica y Biología Molecular
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dc.subject.classification
Ciencias Biológicas
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dc.subject.classification
CIENCIAS NATURALES Y EXACTAS
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dc.title
Elucidating paramylon and other carbohydrate metabolism in Euglena gracilis: Kinetic characterization, structure and cellular localization of UDP-glucose pyrophosphorylase
dc.type
info:eu-repo/semantics/article
dc.type
info:ar-repo/semantics/artículo
dc.type
info:eu-repo/semantics/publishedVersion
dc.date.updated
2019-09-27T14:55:12Z
dc.journal.volume
154
dc.journal.pagination
176-186
dc.journal.pais
Francia
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dc.journal.ciudad
Paris
dc.description.fil
Fil: Muchut, Robertino José. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Santa Fe. Instituto de Agrobiotecnología del Litoral. Universidad Nacional del Litoral. Instituto de Agrobiotecnología del Litoral; Argentina
dc.description.fil
Fil: Calloni, Rodrigo Daniel. Universidad Nacional del Litoral; Argentina
dc.description.fil
Fil: Herrera, Fernando Enrique. Universidad Nacional del Litoral; Argentina
dc.description.fil
Fil: Garay, Alberto Sergio. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Santa Fe. Instituto de Agrobiotecnología del Litoral. Universidad Nacional del Litoral. Instituto de Agrobiotecnología del Litoral; Argentina
dc.description.fil
Fil: Arias, Diego Gustavo. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Santa Fe. Instituto de Agrobiotecnología del Litoral. Universidad Nacional del Litoral. Instituto de Agrobiotecnología del Litoral; Argentina
dc.description.fil
Fil: Iglesias, Alberto Daniel. Universidad Nacional del Litoral; Argentina
dc.description.fil
Fil: Guerrero, Sergio Adrian. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Santa Fe. Instituto de Agrobiotecnología del Litoral. Universidad Nacional del Litoral. Instituto de Agrobiotecnología del Litoral; Argentina
dc.journal.title
Biochimie
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dc.relation.alternativeid
info:eu-repo/semantics/altIdentifier/url/https://linkinghub.elsevier.com/retrieve/pii/S0300908418302669
dc.relation.alternativeid
info:eu-repo/semantics/altIdentifier/doi/http://dx.doi.org/10.1016/j.biochi.2018.09.006
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