Caracterización y expresión del gen de la vitelogenina en el vector de la enfermedad de Chagas Triatoma infestans (Hemiptera: Reduviidae)

Abstract

Con el propósito de analizar en Triatoma infestans un gen involucrado en el proceso de ovogénesis como el que codifica para vitelogenina (Vg), fosfolipoglicoproteína precursora de vitelina (Vt), se inició el estudio con la identificación de dos genes Vg (Vg1 y Vg2). Se determinaron los patrones de expresión de ambos genes a nivel de transcripción (qPCR) y proteico (Western Blot) en cuerpo graso y ovarios de hembras adultas durante la fase previtelogénica (período sin alimentar) y vitelogénica (después de la ingesta de sangre). Además, la expresión a nivel de ARNm se analizó en diferentes tejidos de hembras y machos adultos y en cuerpo graso de ninfas de quinto estadio. No se detectó ARNm de Vg en ninfas ni en machos adultos. Ambos genes se expresaron a nivel transcripcional y proteíco en cuerpo graso y ovarios de las hembras adultas y se observó un efecto significativo de la alimentación en los niveles de dicha expresión en el cuerpo graso. Además, mediante ensayos de inmunofluorescencia, se detectó una fuerte señal para Vt en los folículos terminales de hembras vitelogénicas. El silenciamiento de los genes Vg mediante ARN de interferencia (ARNi) disminuyó su expresión en cuerpo graso y ovarios de hembras adultas, observándose ausencia de oviposición.

Two vitellogenin genes (Vg1 and Vg2) were identified in the Chagas’ disease vector Triatoma infestans. The expression levels of both genes were determined by qPCR and Western Blot in fat body and ovaries of adult females, at different times after molting (pre-vitellogenesis, unfed period) and after a blood meal (vitellogenic phase). Vg1 and Vg2 genes were also evaluated by qPCR in different tissues of adult males and females as well as in fat body of fifth instar nymphs. No trace of Vg1 or Vg2 mRNAs was detected in adult males or in nymphs. Both, Vg1 and Vg2 genes, were expressed in the fat bodies and ovaries of adult females. The data showed a significant effect of feeding on the Vg1 and Vg2 mRNA levels and protein levels in the fat body of adult females. Besides, the immunoflourescence assays showed a strong signal for vitellin (Vt) in the yolk bodies of terminal follicles of vitellogenic females. The involvement of different organs in the synthesis of Vg suggests a different role for these Vgs that support the oocyte growth. The silencing of the Vg genes by RNAi decreased their expression in fat body and ovaries of adult females and was observed absence of oviposition.