A survey of denitrifying Azospirillum brasilense in two contrasted conditions of the sugarcane cropping region of Tucumán, Argentina

Abstract

The aim of this work was the assessment of denitrifying Azospirillum brasilense isolates in two contrasted regions in the sugarcane cropping region of Tucumán, Argentina. For that, Azospirillum was isolated from the rhizoplane of sugarcane plants using nitrogen-free malate semisolid medium. Microbiological characteristics and restriction profiles of 16S rDNA indicated the presence of A. brasilense. PCR analysis of the isolates showed that the key enzyme for denitrification corresponded to the nitrite reductase type nirS. There were differences among the isolates in their physiological response to the nitrite reductase activity and the enzymatic restriction profiles of the nirS fragment. Differences among the isolates at genomic level were also assessed by RAPD method. According to the higher naturally occurrence of denitrifying Azospirillum in the wetter area of the sugarcane cropping region, our results suggest the existence of an influence of rainfall regime and soil characteristics in their environmental distribution. The knowledge of the ecology of denitrifiers (in this case, Azospirillum strains), represents a step forward to the rational utilization of microbial diversity in agriculture.

El objetivo de este trabajo fue evaluar aislamientos desnitrificadores de Azospirillum en dos regiones cañeras contrastantes de Tucumán, Argentina. Para ello, Azospirillum fue aislado del rizoplano de caña de azúcar en medio de cultivo semisólido, libre de nitrógeno. La caracterización microbiológica y los perfiles de restricción de gen 16S ADNr indicaron la presencia de A. brasilense. El análisis por PCR mostró que la enzima clave para la desnitrificación corresponde a la nitrato reductasa tipo nirS. Los aislamientos mostraron distinta respuesta fisiológica en la actividad nitrato reductasa y en los perfiles de restricción enzimática de nirS. La diferencia entre los aislamientos, a nivel genómico, también fue evaluada por RAPD. De acuerdo con la mayor incidencia natural desnitrificadora de Azospirillum en la zona más húmeda (NMP) de la región cañera, estos resultados sugieren la existencia de una influencia del régimen de lluvias y de las características del suelo en su distribución ambiental. El estudio de la ecología de los desnitrificadores (en este caso, cepas de Azospirillum), contribuye a ampliar el conocimiento sobre la diversidad microbiana en la agricultura.