Diferenciación de serovares de leptospiras patógenas mediante PCR LigB y secuenciación

Abstract

La leptospirosis es la zoonosis de mayor distribución mundial. El objetivo del presente trabajo fue desarrollar una técnica molecular que diferencie leptospiras patógenas. Se amplificó mediante PCR y secuenció una región de la adhesina LigB, presente solo en las especies patógenas. Se utilizaron los iniciadores LigBFpet y LigBRpet. Los mismos, lograron amplificar el ADN blanco de las cepas patógenas referenciales L. interrogans serovares: Pomona cepa Pomona, Canicola cepa Hond Utrecht IV, Copenhageni cepa M 20, Wolffi cepa 3705, Pyrogenes cepa Salinem y Hardjo cepa Hardjoprajitmo, L. borgpetersenii serovar Castellonis cepa Castellon 3 y de cuatro cepas patógenas aisladas de bovino, porcino, rata y comadreja. En las cepas referenciales no patógenas utilizadas, L. biflexa serovares Patoc cepa Patoc I y Andamana cepa Andamana, no hubo amplificación. La secuenciación de los productos amplificados, expuso una suficiente variación entre los serovares estudiados, que los diferencia.

Differentiation of pathogenic leptospires spp by PCR and sequencing. Leptospirosis is the zoonosis with worldwide distribution. The objective of this work was to develop a molecular technique to differentiate pathogenic Leptospira spp. It was amplified by PCR and sequenced a region of the adhesin LigB, present only in the pathogenic species. LigBRpet LigBFpet primers were used. This, amplifies the target DNA of the reference strains pathogenic L. interrogans serovars Pomona strain Pomona, Canicola strain Hond Utrecht IV, Copenhageni strain M 20, Wolffi strain 3705, Pyrogenes strain Salinem, Hardjo strain Hardjoprajitmo, L. borgpetersenii serovar Castellonis strain Castellon 3 and 4 pathogenic strains isolated from bovine, pig, rat and opossum. L. biflexa serovars Patoc strain Patoc I and Andamana strain Andamana not amplified. Sequencing of the amplified products, exhibited sufficient variation between serovars that difference them.