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Artículo

Cytoplasmic injection of murine zygotes with Sleeping Beauty transposon plasmids and minicircles results in the efficient generation of germline transgenic mice

Garrels, Wiebke; Talluri, Thirumala R.; Ziegler, Maren; Most, Ilka; Forcato, Diego OscarIcon ; Schmeer, Marco; Schleef, Martin; Ivics, Zoltán; Kues, Wilfried A.
Fecha de publicación: 01/2016
Editorial: Wiley VCH Verlag
Revista: Biotechnology Journal
ISSN: 1860-7314
Idioma: Inglés
Tipo de recurso: Artículo publicado
Clasificación temática:
Otras Ciencias Biológicas

Resumen

Transgenesis in the mouse is an essential tool for the understanding of gene function and genome organization. Here, we describe a simplified microinjection protocol for efficient germline transgenesis and sustained transgene expression in the mouse model employing binary Sleeping Beauty transposon constructs of different topology. The protocol is based on co‐injection of supercoiled plasmids or minicircles, encoding the Sleeping Beauty transposase and a transposon construct, into the cytoplasm of murine zygotes. Importantly, this simplified injection avoids the mechanical penetration of the vulnerable pronuclear membrane, resulting in higher survival rates of treated embryos and a more rapid pace of injections. Upon translation of the transposase, transposase‐catalyzed transposition into the genome results in stable transgenic animals carrying monomeric transgenes. In summary, cytoplasmic injection of binary transposon constructs is a feasible, plasmid‐based, and simplified microinjection method to generate genetically modified mice. The modular design of the components allows the multiplexing of different transposons, and the generation of multi‐transposon transgenic mice in a single step.
Palabras clave: Active Transgenesis , Genetic Engineering , Simplified Microinjection , Synthetic Biology , Transposition
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info:eu-repo/semantics/openAccess Excepto donde se diga explícitamente, este item se publica bajo la siguiente descripción: Creative Commons Attribution-NonCommercial-ShareAlike 2.5 Unported (CC BY-NC-SA 2.5)
Identificadores
URI: http://hdl.handle.net/11336/69856
DOI: http://dx.doi.org/10.1002/biot.201500218
URL: https://onlinelibrary.wiley.com/doi/abs/10.1002/biot.201500218
Colecciones
Articulos(CCT - CORDOBA)
Articulos de CTRO.CIENTIFICO TECNOL.CONICET - CORDOBA
Citación
Garrels, Wiebke; Talluri, Thirumala R.; Ziegler, Maren; Most, Ilka; Forcato, Diego Oscar; et al.; Cytoplasmic injection of murine zygotes with Sleeping Beauty transposon plasmids and minicircles results in the efficient generation of germline transgenic mice; Wiley VCH Verlag; Biotechnology Journal; 11; 1; 1-2016; 178-184
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