Aislamiento de una fracción pequeña del dermatán sulfato con potencial aplicación terapéutica

Abstract

El descubrimiento del cofactor II de la heparina (HCoII), desplazó el enfoque de las investigaciones sobre el mecanismo de la coagulación desde la heparina, que se encuentra fundamentalmente en los mastocitos, hacia el dermatán sulfato (DS) que posee una distribución mucho más amplia en los tejidos y en las paredes de los vasos sanguíneos. El nuevo cofactor de la heparina es el único cuya actividad anticoagulante es estimulada por el DS, en concentraciones diez veces menores que la heparina y el heparán sulfato (HS). Se ha descripto el aislamiento de fracciones de la heparina con muy alta actividad anticoagulante a través de la interacción con la Concanavalina A y con la primera proteína del sistema del complemento (C1). En ambos casos fueron imprescindibles condiciones de baja fuerza iónica y presencia de iones calcio. Los experimentos con la heparina se extendieron al DS en presencia del C1, utilizando las mismas condiciones experimentales descriptas, y se determinaron la actividad biológica y el grado de sulfatación de las subpoblaciones aisladas después de la interacción. Se obtuvo en el precipitado una fracción del DS de bajo peso molecular con una actividad anticoagulante cuatro veces mayor que el material inicial, un contenido en sulfatos aproximadamente tres veces mayor, y tres veces más capacidad de inhibición de la formación de trombos. El peso molecular de esta fracción es inferior a 8.000 Daltons.

Heparin is mainly found in mastocytes, and during many decades the studies of the coagulation mechanism were focused on this hetero-polysaccaride. Dermatan sulfate has a more abundant distribution on tissues and on the blood vascular system. On the other hand, the anticoagulant activity of the second cofactor of heparin is stimulated by dermatan sulfate, but using ten times less concentration than heparin. Our earlier experiments with heparin and Concanavalin A, and heparin and the first protein of the complement system, C1, have shown the isolation in the heparin molecule by precipitation with both proteins of fractions with very high anticoagulant activity. In both cases the use of very low ionic strength and the presence of calcium ions were necesary. We have extended those experiments to the interaction with dermatan sulfate, and we have also obtained a fraction of dermatan sulfate in the precipitate with very low molecular weight, and with four times higher anticoagulant activity than the fraction that remains in the supernatant. The sulfate content of this fraction is three times higher, as well as its capacity for thrombous inhibition. Molecular weight of this fraction is 8000 Daltons.