Toxicity, freezing and cold storage tests of native species semen

Abstract

In the first part of this study, toxicity tests were performed on the sperm of Macrobrachiumacanthurus using four cryoprotectants for periods of 10 and 20 min at concentrations of 10 and 20%.In the second part, cryopreservation was performed by applying the least toxic cryoprotectant, andtwo freezing methods were tested over 24 hours: automated (protocols A and B) and conventional(protocols C and D). Protocol A exhibited a cooling rate of 0.5°C min-1 from -6°C to -32°C; protocolB was similar to A except for the starting temperature, which was room temperature; whereasprotocols C and D exhibited a cooling rate of 2 and 10°C min-1, respectively. The third part ofthe study was conducted to assess the lifespan of the sperm when stored at 5°C, in which spermviability was evaluated by a semen smear with eosin-nigrosin. The least toxic cryoprotectants were10 and 20% glycerol, and 10% methanol, and the equilibrium time was 10 minutes. The optimalcooling rate was 2°C min-1 for 10% glycerol, which had a sperm survival rate of 21.8%. Cold storagefor up to 3 days is recommended, presenting a sperm survival rate of 35.3%.Key words: caridea; cryopreservation; cryoprotectants; glycerol; methanol; shrimp

A primeira estapa deste trabalho testou a toxicidade de quatro crioprotetores em espermatozoides de Macrobrachium acanthurus durante 10 e 20 min nas concentrações de 10 e 20%. A segunda etapa foi realizar a criopreservação aplicando o crioprotetor com menor grau de toxicidade, testanto dois mecanismos de congelamento, um automatizado (protocolos A e B) e outro convencional (protocolos C e D), durante 24 horas. O protocolo A apresentou velocidade de resfriamento de 0,5°C min-1 até alcançar -32°C, partindo de uma temperatura de -6°C e idem o protocolo B, com a diferença de partir de uma temperatura ambiente; os protocolos C e D apresentaram uma velocidade de resfriamento de 2 e 10°C min-1, respectivamente, sendo as palhetas transferidas ao nitrogênio líquido. A terceira etapa foi verificar o tempo de vida do espermatozoide quando refrigerado a 5°C. A viabilidade espermática foi avaliada por meio do esfregaço de sêmen com eosina-nigrosina. Os crioprotetores que se apresentaram menos tóxicos foram o glicerol 10 e 20% emetanol 10%, num tempo de equilíbrio de 10 minutos. A melhor velocidade de congelamento foi a de 2°C min-1 para glicerol 10%, com 21,8% de sobrevivência espermática, sendo a refrigeração até três dias recomendada, com uma sobrevivência de 35,3%.