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dc.contributor.author
Britos, Maria Rosenda
dc.contributor.author
Sin, Cynthya Solange
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dc.contributor.author
Vasek, Olga M.
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dc.contributor.author
Ortega, Silvia Mercedes
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dc.date.available
2018-10-31T17:35:57Z
dc.date.issued
2017-11
dc.identifier.citation
Britos, Maria Rosenda; Sin, Cynthya Solange; Vasek, Olga M.; Ortega, Silvia Mercedes; Diagnóstico molecular de Porphyromona gingivalis: estandarización del método; Círculo Argentino de Odontología; Revista del Círculo Argentino de Odontología; 75; 225; 11-2017; 15-18
dc.identifier.issn
0325-7479
dc.identifier.uri
http://hdl.handle.net/11336/63390
dc.description.abstract
El objetivo del presente trabajo fue estandarizar y optimizar la técnica de PCR convencional para detección de Porphyromonas gingivalis ATCC 33277. Material y métodos: Las cepa de P. gingivalis ATCC33227 se sembró en agar Bruella enriquecido con sangre de carnero, suplementado con hemina y Vitamina K. El ADN se extrajo empleando el protocolo que emplea Bromuro de cetil trimetilamonio (CTAB) .Se evaluó la cantidad y calidad del material genético obtenido con el fotómetro UV Ampli-Quat, AQ-07 Nucleic Acid. Se realizó la PCR convencional con diferentes concentraciones de MgCl2 1 mM, 1,5 mM y 2.0 mM y a dos temperaturas de alineamiento: 60 °C y 55 °C. Los productos PCR se separaron por electroforesis en un gel de agarosa 1 % Las bandas se visualizaron en un fotodocumentador. La sensibilidad se calculó teniendo en cuenta el número de bacterias en diferentes diluciones. Resultados: Se obtuvo una concentración 1,55x106 ng/ul de DNA genómico a partir de una suspensión bacteriana de 108 células bacterianas/ml, con índice de pureza 1,648 (relación de OD260/OD280). Los mejores resultados se obtuvieron con una concentración de 2 mM de MgCl2 y una temperatura de alineación de 55°C. En cuanto a la sensibilidad se obtuvo un límite de detección de 5 x 10 / 5 µL células bacterianas en suspensión. Conclusión. En la prueba de PCR convencional para Porphyromonas gingivalis ATCC 33277, las condiciones óptimas de estandarizacion son la concentración de 2 mM de MgCl y temperatura de alineación 55°C y es necesario una carga bacteriana mínima de 5 x 10 células/5 ul como límite de detección.
dc.description.abstract
The objective of the present work was to standardize and optimize the conventional PCR technique for detection of Porphyromonas gingivalis ATCC 33277. Material and methods: P. gingivalis strain ATCC33227 was planted on Bruella agar enriched with sheep's blood supplemented with hemin and Vitamin K DNA was extracted using the protocol using cetyl trimethylammonium bromide (CTAB). The quantity and quality of the genetic material obtained with the UV Ampli-Quat photometer, AQ-07 Nucleic Acid. Conventional PCR was performed with different concentrations of 1 mM MgCl 2, 1.5 mM and 2.0 mM and at two alignment temperatures: 60°C and 55°C. PCR products were separated by electrophoresis on a 1% agarose gel. The bands were visualized in a photodocumentator. Sensitivity was calculated by taking into account the number of bacteria in different dilutions. Results: A concentration of 1.55x106 ng / ul genomic DNA was obtained from a bacterial suspension of 108 bacterial cells / ml, with purity index 1.648 (OD260 / OD280 ratio). The best results were obtained with a concentration of 2 mM MgCl2 and an alignment temperature of 55°C. Regarding sensitivity, a limit of detection of 5 x 10/5 μL bacterial cells in suspension was obtained. Conclusion: In the standard PCR test for Porphyromonas gingivalis ATCC 33277 the optimum standardization conditions are the concentration of 2 mM MgCl and 55°C and a minimum bacterial load of 5 x 10 cells / 5 ul as detection limit is required.
dc.format
application/pdf
dc.language.iso
spa
dc.publisher
Círculo Argentino de Odontología
dc.rights
info:eu-repo/semantics/openAccess
dc.rights.uri
https://creativecommons.org/licenses/by-nc-sa/2.5/ar/
dc.subject
Enfermedad Periodontal
dc.subject
Porpphyromonas Gingivalis
dc.subject
Factores de Virulencia
dc.subject
Respuesta Inmunológica
dc.subject.classification
Otras Ciencias de la Salud
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dc.subject.classification
Ciencias de la Salud
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dc.subject.classification
CIENCIAS MÉDICAS Y DE LA SALUD
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dc.title
Diagnóstico molecular de Porphyromona gingivalis: estandarización del método
dc.title
Molecular diagnosis of Porphyromonas gingivalis: Standardization of the method
dc.type
info:eu-repo/semantics/article
dc.type
info:ar-repo/semantics/artículo
dc.type
info:eu-repo/semantics/publishedVersion
dc.date.updated
2018-10-24T13:33:49Z
dc.journal.volume
75
dc.journal.number
225
dc.journal.pagination
15-18
dc.journal.pais
Argentina
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dc.description.fil
Fil: Britos, Maria Rosenda. Universidad Nacional del Nordeste. Facultad de Odontologia; Argentina
dc.description.fil
Fil: Sin, Cynthya Solange. Universidad Nacional del Nordeste. Facultad de Odontologia; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Nordeste. Instituto de Modelado e Innovación Tecnológica. Universidad Nacional del Nordeste. Facultad de Ciencias Exactas Naturales y Agrimensura. Instituto de Modelado e Innovación Tecnológica; Argentina
dc.description.fil
Fil: Vasek, Olga M.. Universidad Nacional del Nordeste. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales y Agrimensura; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas; Argentina
dc.description.fil
Fil: Ortega, Silvia Mercedes. Universidad Nacional del Nordeste. Facultad de Odontologia; Argentina
dc.journal.title
Revista del Círculo Argentino de Odontología
dc.relation.alternativeid
info:eu-repo/semantics/altIdentifier/url/http://lineip.com.ar/caoweb/revistas/
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