Estandarización del análisis multi-locus de número variable de repeticiones en tándem para el estudio de Staphylococcus aureus resistentes a meticilina aislados de la comunidad en Paraguay

Abstract

Staphylococcus aureus es un patógeno capaz de causar infecciones con amplio rango de severidad y adaptarse a diferentes tejidos. Su epidemiología es compleja, por circulación de cientos de clones a nivel mundial, lo que requiere de métodos moleculares reproducibles y de alto poder discriminatorio para la identificación de los mismos.El presente estudio tuvo como objetivo principal la estandarización del análisis multi-locus de número variable de repeticiones en tándem (MLVA) para análisis de variabilidad genética de aislados de S. aureus previamente tipificados por electroforesis en gel de campo pulsado (PFGE), gold standard para tipificación de aislados. La MLVA se realizó por amplificación de 7 locus VNTR (clfA, clfB, sdrC, sdrD, sdrE, sspA y spA) por PCR. Se alcanzó un alto nivel de reproducibilidad. El empleo de cepas previamente tipificadas por análisis de secuencias multi-locus (MLST), PFGE, locus spa y cassette SCCmec, permitió validar de forma comparativa el agrupamiento generado por MLVA. Los aislados que fueron agrupados como idénticos por MLVA presentaron resultados congruentes con la totalidad de las otras técnicas moleculares y esta demostró ser más sensible que PFGE para distinguir entre aislados que presentaron patrones PFGE idénticos. La MLVA cumple todos los criterios de un método de tipificación útil.

Staphylococcus aureus is a pathogen that can produce several infections with a wide range of severity and it has the hability to adapt to different tissues. The epidemiology is complex, by circulation of many differents clones worlwide, so the analysis for its identification requires reproducible and high discriminatory powder molecular methods. The aim of this study was to standardize the molecular technique multiple-locus variable number of tandem repeat analysis (MLVA) for the genetic variability analysis of S. aureus isolates, previously characterized by pulsed field gel electrophoresis (PFGE). The MLVA was made by PCR amplification of seven VNTR locus (clfA, clfB, sdrC, sdrD, sdrE, sspA y spA). A high level of reproducibility has reached in the study. The use of isolates previously typified by multi-locus secuencing typing (MLST), PFGE, locus spa and cassette SCCmec, allowed to validate the MLVA clusters comparatively. The isolates that were clustered by MLVA as the same isolate, showed the same results by other molecular techniques, and the MLVA can distinguish isolates with identical PFGE patterns. This technique have all criteria of a usefull molecular typification technique.