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dc.contributor.author Guerra, Luciano Lucas
dc.contributor.author Faccinetti, Natalia Ines
dc.contributor.author Trabucchi, Aldana
dc.contributor.author Rovitto, Bruno David
dc.contributor.author Sabljic, Adriana Victoria
dc.contributor.author Poskus, Edgardo
dc.contributor.author Iacono, Ruben Francisco
dc.contributor.author Valdez, Silvina Noemi
dc.date.available 2018-06-06T20:04:43Z
dc.date.issued 2016-11
dc.identifier.citation Guerra, Luciano Lucas; Faccinetti, Natalia Ines; Trabucchi, Aldana; Rovitto, Bruno David; Sabljic, Adriana Victoria; et al.; Novel prokaryotic expression of thioredoxin-fused insulinoma associated protein tyrosine phosphatase 2 (IA-2), its characterization and immunodiagnostic application; BioMed Central; Bmc Biotechnology; 16; 1; 11-2016; 1-19
dc.identifier.issn 1472-6750
dc.identifier.uri http://hdl.handle.net/11336/47586
dc.description.abstract Background The insulinoma associated protein tyrosine phosphatase 2 (IA-2) is one of the immunodominant autoantigens involved in the autoimmune attack to the beta-cell in Type 1 Diabetes Mellitus. In this work we have developed a complete and original process for the production and recovery of the properly folded intracellular domain of IA-2 fused to thioredoxin (TrxIA-2ic) in Escherichia coli GI698 and GI724 strains. We have also carried out the biochemical and immunochemical characterization of TrxIA-2icand design variants of non-radiometric immunoassays for the efficient detection of IA-2 autoantibodies (IA-2A). Results The main findings can be summarized in the following statements: i) TrxIA-2ic expression after 3 h of induction on GI724 strain yielded ≈ 10 mg of highly pure TrxIA-2ic/L of culture medium by a single step purification by affinity chromatography, ii) the molecular weight of TrxIA-2ic (55,358 Da) could be estimated by SDS-PAGE, size exclusion chromatography and mass spectrometry, iii) TrxIA-2ic was properly identified by western blot and mass spectrometric analysis of proteolytic digestions (63.25 % total coverage), iv) excellent immunochemical behavior of properly folded full TrxIA-2ic was legitimized by inhibition or displacement of [35S]IA-2 binding from IA-2A present in Argentinian Type 1 Diabetic patients, v) great stability over time was found under proper storage conditions and vi) low cost and environmentally harmless ELISA methods for IA-2A assessment were developed, with colorimetric or chemiluminescent detection. Conclusions E. coli GI724 strain emerged as a handy source of recombinant IA-2ic, achieving high levels of expression as a thioredoxin fusion protein, adequately validated and applicable to the development of innovative and cost-effective immunoassays for IA-2A detection in most laboratories.
dc.format application/pdf
dc.language.iso eng
dc.publisher BioMed Central
dc.rights info:eu-repo/semantics/openAccess
dc.rights.uri https://creativecommons.org/licenses/by-nc-sa/2.5/ar/
dc.subject RECOMBINANT PROTEIN EXPRESSION
dc.subject DIABETES MELLITUS
dc.subject AUTOANTIBODY
dc.subject AUTOIMMUNITY
dc.subject IMMUNOASSAY
dc.subject ESCHERICHIA COLI
dc.subject.classification Otras Ciencias Biológicas
dc.subject.classification Ciencias Biológicas
dc.subject.classification CIENCIAS NATURALES Y EXACTAS
dc.title Novel prokaryotic expression of thioredoxin-fused insulinoma associated protein tyrosine phosphatase 2 (IA-2), its characterization and immunodiagnostic application
dc.type info:eu-repo/semantics/article
dc.type info:ar-repo/semantics/artículo
dc.type info:eu-repo/semantics/publishedVersion
dc.date.updated 2018-06-01T19:27:09Z
dc.journal.volume 16
dc.journal.number 1
dc.journal.pagination 1-19
dc.journal.pais Reino Unido
dc.journal.ciudad Londres
dc.description.fil Fil: Guerra, Luciano Lucas. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto de Estudios de la Inmunidad Humoral Prof. Ricardo A. Margni. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Farmacia y Bioquímica. Instituto de Estudios de la Inmunidad Humoral Prof. Ricardo A. Margni; Argentina
dc.description.fil Fil: Faccinetti, Natalia Ines. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto de Estudios de la Inmunidad Humoral Prof. Ricardo A. Margni. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Farmacia y Bioquímica. Instituto de Estudios de la Inmunidad Humoral Prof. Ricardo A. Margni; Argentina
dc.description.fil Fil: Trabucchi, Aldana. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto de Estudios de la Inmunidad Humoral Prof. Ricardo A. Margni. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Farmacia y Bioquímica. Instituto de Estudios de la Inmunidad Humoral Prof. Ricardo A. Margni; Argentina
dc.description.fil Fil: Rovitto, Bruno David. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto de Estudios de la Inmunidad Humoral Prof. Ricardo A. Margni. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Farmacia y Bioquímica. Instituto de Estudios de la Inmunidad Humoral Prof. Ricardo A. Margni; Argentina
dc.description.fil Fil: Sabljic, Adriana Victoria. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto de Estudios de la Inmunidad Humoral Prof. Ricardo A. Margni. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Farmacia y Bioquímica. Instituto de Estudios de la Inmunidad Humoral Prof. Ricardo A. Margni; Argentina
dc.description.fil Fil: Poskus, Edgardo. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto de Estudios de la Inmunidad Humoral Prof. Ricardo A. Margni. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Farmacia y Bioquímica. Instituto de Estudios de la Inmunidad Humoral Prof. Ricardo A. Margni; Argentina
dc.description.fil Fil: Iacono, Ruben Francisco. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto de Estudios de la Inmunidad Humoral Prof. Ricardo A. Margni. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Farmacia y Bioquímica. Instituto de Estudios de la Inmunidad Humoral Prof. Ricardo A. Margni; Argentina
dc.description.fil Fil: Valdez, Silvina Noemi. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto de Estudios de la Inmunidad Humoral Prof. Ricardo A. Margni. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Farmacia y Bioquímica. Instituto de Estudios de la Inmunidad Humoral Prof. Ricardo A. Margni; Argentina
dc.journal.title Bmc Biotechnology
dc.relation.alternativeid info:eu-repo/semantics/altIdentifier/url/http://bmcbiotechnol.biomedcentral.com/articles/10.1186/s12896-016-0309-2
dc.relation.alternativeid info:eu-repo/semantics/altIdentifier/doi/https://doi.org/10.1186/s12896-016-0309-2
dc.conicet.fuente Crossref


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