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dc.contributor.author
Cristaldi, Julio César
dc.contributor.author
Gómez, María C.
dc.contributor.author
González, Pablo Javier
dc.contributor.author
Ferroni, Felix Martín
dc.contributor.author
Dalosto, Sergio Daniel
dc.contributor.author
Rizzi, Alberto Claudio
dc.contributor.author
Rivas, Maria Gabriela
dc.contributor.author
Brondino, Carlos Dante
dc.date.available
2018-03-06T14:34:23Z
dc.date.issued
2018-03
dc.identifier.citation
Cristaldi, Julio César; Gómez, María C.; González, Pablo Javier; Ferroni, Felix Martín; Dalosto, Sergio Daniel; et al.; Study of the Cys-His bridge electron transfer pathway in a copper-containing nitrite reductase by site-directed mutagenesis, spectroscopic, and computational methods; Elsevier Science; Biochimica et Biophysica Acta- General Subjects; 1862; 3; 3-2018; 752-760
dc.identifier.issn
0304-4165
dc.identifier.uri
http://hdl.handle.net/11336/37941
dc.description.abstract
The Cys-His bridge as electron transfer conduit in the enzymatic catalysis of nitrite to nitric oxide by nitrite reductase from Sinorhizobium meliloti 2011 (SmNir) was evaluated by site-directed mutagenesis, steady state kinetic studies, UV-vis and EPR spectroscopic measurements as well as computational calculations. The kinetic, structural and spectroscopic properties of the His171Asp (H171D) and Cys172Asp (C172D) SmNir variants were compared with the wild type enzyme. Molecular properties of H171D and C172D indicate that these point mutations have not visible effects on the quaternary structure of SmNir. Both variants are catalytically incompetent using the physiological electron donor pseudoazurin, though C172D presents catalytic activity with the artificial electron donor methyl viologen (kcat =3.9(4) s-1) lower than that of wt SmNir (kcat =240(50) s-1). QM/MM calculations indicate that the lack of activity of H171D may be ascribed to the Nδ1H...OC hydrogen bond that partially shortcuts the T1-T2 bridging Cys-His covalent pathway. The role of the Nδ1H...OC hydrogen bond in the pH-dependent catalytic activity of wt SmNir is also analyzed by monitoring the T1 and T2 oxidation states at the end of the catalytic reaction of wt SmNir at pH6 and 10 by UV-vis and EPR spectroscopies. These data provide insight into how changes in Cys-His bridge interrupts the electron transfer between T1 and T2 and how the pH-dependent catalytic activity of the enzyme are related to pH-dependent structural modifications of the T1-T2 bridging chemical pathway.
dc.format
application/pdf
dc.language.iso
eng
dc.publisher
Elsevier Science
dc.rights
info:eu-repo/semantics/openAccess
dc.rights.uri
https://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/2.5/ar/
dc.subject
Copper
dc.subject
Denitrification
dc.subject
Electron Transfer Pathway
dc.subject
Enzyme Mechanism
dc.subject
Nitrite Reductase
dc.subject
Sinorhizobium Meliloti 2011
dc.subject.classification
Otras Ciencias Biológicas
dc.subject.classification
Ciencias Biológicas
dc.subject.classification
CIENCIAS NATURALES Y EXACTAS
dc.title
Study of the Cys-His bridge electron transfer pathway in a copper-containing nitrite reductase by site-directed mutagenesis, spectroscopic, and computational methods
dc.type
info:eu-repo/semantics/article
dc.type
info:ar-repo/semantics/artículo
dc.type
info:eu-repo/semantics/publishedVersion
dc.date.updated
2018-03-05T20:45:38Z
dc.journal.volume
1862
dc.journal.number
3
dc.journal.pagination
752-760
dc.journal.pais
Países Bajos
dc.journal.ciudad
Amsterdam
dc.description.fil
Fil: Cristaldi, Julio César. Universidad Nacional del Litoral. Facultad de Bioquímica y Ciencias Biológicas. Departamento de Física; Argentina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Santa Fe; Argentina
dc.description.fil
Fil: Gómez, María C.. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Santa Fe; Argentina. Universidad Nacional del Litoral. Facultad de Bioquímica y Ciencias Biológicas. Departamento de Física; Argentina
dc.description.fil
Fil: González, Pablo Javier. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Santa Fe; Argentina. Universidad Nacional del Litoral. Facultad de Bioquímica y Ciencias Biológicas. Departamento de Física; Argentina
dc.description.fil
Fil: Ferroni, Felix Martín. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Santa Fe; Argentina. Universidad Nacional del Litoral. Facultad de Bioquímica y Ciencias Biológicas. Departamento de Física; Argentina
dc.description.fil
Fil: Dalosto, Sergio Daniel. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Santa Fe. Instituto de Física del Litoral. Universidad Nacional del Litoral. Instituto de Física del Litoral; Argentina
dc.description.fil
Fil: Rizzi, Alberto Claudio. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Santa Fe; Argentina. Universidad Nacional del Litoral. Facultad de Bioquímica y Ciencias Biológicas. Departamento de Física; Argentina
dc.description.fil
Fil: Rivas, Maria Gabriela. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Santa Fe; Argentina. Universidad Nacional del Litoral. Facultad de Bioquímica y Ciencias Biológicas. Departamento de Física; Argentina
dc.description.fil
Fil: Brondino, Carlos Dante. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - Santa Fe; Argentina. Universidad Nacional del Litoral. Facultad de Bioquímica y Ciencias Biológicas. Departamento de Física; Argentina
dc.journal.title
Biochimica et Biophysica Acta- General Subjects
dc.relation.alternativeid
info:eu-repo/semantics/altIdentifier/url/https://www.sciencedirect.com/science/article/pii/S0304416517303409
dc.relation.alternativeid
info:eu-repo/semantics/altIdentifier/doi/http://dx.doi.org/10.1016/j.bbagen.2017.10.011