Diagnóstico molecular y serológico de leptospirosis humana en la provincia de Buenos Aires, Argentina

Abstract

El objetivo del presente trabajo fue aplicar la técnica de PCR en tiempo real para detectar ADN de los serovares más comunes de leptospiras que infectan humanos a partir de cultivos puros de referencia, y de sueros de pacientes en distintas etapas de infección. Se realizó extracción, amplificación y cuantificación del ADN de cultivos puros de Leptospira interrogans serovares Canicola, Icterohaemorrhagiae, Pomona, Pyrogenes y Hardjo; Leptospira borgpeterseni serovares Tarassovi, Wolffi y Castellonis y Leptospira kirschneri serovar Grippotyphosa. La sensibilidad de la PCR en tiempo real in vitro fue en promedio de 8 genomas. A partir de 23 muestras de sueros de pacientes con sospecha clínica de leptospirosis se determinó por la técnica de aglutinación microscópica (MAT) la presencia de anticuerpos, y por PCR en tiempo real con dos pares de cebadores diferentes, la presencia de ADN bacteriano. En el período agudo de la enfermedad (1 a 7 días) MAT fue positivo en 9/10 muestras y PCR en tiempo real en 8/10. Fue llamativo que 3/4 muestras de período tardío (superior a 14 días) fueran PCR positivas, lo cual no concuerda con la patogenia aceptada para la leptospirosis Debido a estas consideraciones, por el momento, y en nuestro medio, la utilidad de la técnica de PCR es complementaria a la MAT y no debe reemplazarla.

The aim of this study was to apply the technique of real-time PCR to detect DNA of the most common Leptospira serovars that infect humans from pure cultures of reference, and sera from patients at different stages of infection. Extraction, amplification and quantification of DNA from pure cultures of Leptospira interrogansserovars Canicola, Icterohaemorrhagiae, Pomona,Hardjo and Pyrogenes performed; Leptospira serovars borgpeterseniTarassovi, Wolffi and Castellonis and Leptospira serovar kirschneri serovar Grippotyphosa. The in vitro sensitivity of real-time PCR averaged 8 genomes. From 23 serum samples from patients suspected of leptospirosis the presence of antibodies was determined by microscopic agglutination technology (MAT), and the presence of bacterial DNA by real-time PCR with two different primer pairs. In the acute stage of the disease (1-7 days) MAT was positive in 9/10 samples and real-time PCR in 8/10. It was interesting that 3/4 of late period samples (over 14 days) were PCR positive, which is inconsistent with the accepted pathogenesis for leptospirosis. Because of these considerations, for the moment, and in our field, the usefulness of the PCR technique is complementary to the MAT and should not replace it.