Relación radical ascorbilo/ anion ascorbato (A●/Ah¯) como indicador de estrés oxidativo en larvas de Apis mellifera expuestas a Paenibacillus larvae.

Abstract

La relación radical ascorbilo/anión ascorbato (A●/AH¯) se ha señalado como indicio de estrés oxidativo, entendido éste como el estado de sobreproducción de especies reactivas de oxígeno (EROS) o de deficiencia en la capacidad antioxidante de un organismo. Paenibacillus larvae es una bacteria productora de esporas que causa la enfermedad bacteriana Loque americana (LA) en larvas de Apis mellifera. P. larvae destruye el epitelio intestinal e induce al sistema inmune lo que puede causar el estrés oxidativo. En este trabajo se midió la relación A●/AH¯ en larvas al final de su estadio inoculadas in vitro con una dosis subletal (DL25) de esporas de P. larvae. Se determinaron los valores de DL50 de tres aislamientos bacterianos N15, Típica y L33. Las dosis fueron incorporadas en el alimento larval el primer día y se continuó de acuerdo a la dieta de Aupinel y col. (2005). El radical ascorbilo A●, detectado mediante resonancia paramagnética electrónica (EPR), resultó invariable en larvas inoculadas respecto de no inoculadas. Mientras que el anión AH¯, cuantificado por cromatografía líquida de alta performance (HPLC), evidenció un incremento estadísticamente significativo en larvas inoculadas con L33, Típica y N15, en relación a las larvas control (de 10,4 ± 3,7 μM a 20,6 ± 1,5; 16,7 ± 4,5 y 13,1 ± 0.9 μM, respectivamente). Así, la relación A●/AH¯ presentó un valor menor estadísticamente significativo en larvas inoculadas con L33 (0,11 ± 0,01) y con Típica (0,07 ± 0,03 UA) comparado con sus respectivos controles (0,26 ± 0,11 UA; 0,12 ± 0,05 UA). Esta reducción indicaría menor estrés oxidativo en larvas expuestas a P. larvae, frente a las que no, de acuerdo a la virulencia (DL50) de cada cepa (L33 > Típica > N15), y podría estar asociado a un estímulo en el reciclaje del anión AH¯ de las larvas como mecanismo de defensa antioxidante.