Uso de la prueba de desarrollo larval en microagar para caracterizar poblaciones de campo de Cooperia spp. resistente y susceptible a ivermectina

Abstract

Debido a que la producción bovina en Argentina es mayoritariamente de tipo extensiva o pastoril y que las condiciones climáticas son favorables para el desarrollo parasitario, la gastroenteritis verminosa constituye una de las principales causas de pérdidas económicas a nivel del rodeo. Esto ocurre ya que tiene una presentación subclínica que afecta principalmente a animales de recría, produciendo pérdidas de 20-40 kg/animal y siendo imposible la recuperación del peso perdido. El uso continuado de los antihelmínticos durante décadas sin un adecuado manejo ha llevado inexorablemente a la presencia de resistencia antihelmíntica (RA). El primer reporte de RA en bovinos en nuestro país data del año 2001; durante la década siguiente siguieron sumándose reportes de casos individuales y, más tarde, un estudio realizado a nivel nacional demostró que la RA estaba ampliamente distribuida en las principales regiones productoras de bovinos del país, con 95% de establecimientos presentando RA y, de éstos, 93,5% con RA a ivermectina1 . Debido a las pérdidas económicas que conlleva y a que la RA es de carácter genético y, por lo tanto, irreversible, es fundamental realizar un diagnóstico temprano de la misma. La prueba diagnóstica de RA definitiva actual a nivel mundial es la Prueba de Eficacia Controlada (PEC), pero por su alto costo e implicancias en bienestar animal se halla restringido su uso al campo de la investigación. La prueba empleada en la práctica cotidiana es la Prueba de Reducción del Conteo de Huevos (PRCH). Si bien la PRCH es sencilla y económica, presenta como limitante su baja sensibilidad, ya que – en el caso de los bencimidazoles – solo detecta RA cuando la frecuencia de los alelos de resistencia es mayor a 25% en la población parasitaria, por lo que estos cambios genéticos no son detectados hasta que son elevados2 . Por lo tanto, no es posible la detección temprana de RA mediante el uso de esta técnica. Por este motivo, se ha buscado desarrollar técnicas in vitro que solucionen la baja sensibilidad de la PRCH. Las pruebas in vitro para el diagnóstico de RA han tomado mayor relevancia por tratarse de herramientas potencialmente útiles, de bajo costo y que consumen poco tiempo de realización. Dentro de éstas, una de las más comúnmente utilizadas es la Prueba de Desarrollo Larval (PDL), aplicable para detectar resistencia a todos los antihelmínticos de amplio espectro, incluyendo las lactonas macrocíclicas. Sin embargo, ha habido reportes no tan favorables en cuanto a la practicidad de esta técnica para detectar RA a ivermectina debido a la baja solubilidad de esta droga. Como alternativa ante esta problemática se ha empleado eprinomectina, con la que se han obtenido resultados similares a ivermectina. Una variante es la prueba de desarrollo larval en microagar (PDLMA) que ha demostrado poder detectar un mínimo del 10% de la población parasitaria resistente en ovinos3 y es el motivo por el cual se empleó en este proyecto. Los objetivos del presente trabajo fueron: a) comparar los resultados obtenidos usando la PDLMA en dos poblaciones de Cooperia spp. de campo previamente caracterizadas mediante PRCH; b) establecer el factor de resistencia entre ambas poblaciones parasitarias. Para la realización de la PDLMA se emplearon dos poblaciones parasitarias mixtas con predominancia superior a 80% del género Cooperia provenientes dos rodeos experimentales de producción bovina de carne. El aislamiento caracterizado como resistente (R) presentó una reducción del conteo de huevos (RCH) de 85%, mientras que el aislamiento caracterizado como susceptible (S) presentó una RCH de 92%. Para el PDLMA, los huevos de ambos aislamientos se expusieron a doce concentraciones de eprinomectina, desde 4,7x10-10M hasta 2,18x10-11M y se procedieron a incubar en un medio nutritivo constituido por extracto de levaduras durante 7 días a 24°C. Para el aislamiento R se realizaron 10 repeticiones con 4 réplicas cada una y, para el aislamiento S 7 repeticiones con 4 réplicas cada una. Los valores de CE50 obtenidos fueron: 1,725x10-9 M (IC del 95%: 1,51x10⁻ 9M a 1,96x10⁻ 9M) para la población R y 6,10x10-10 M (IC del 95%: 5,69x10-10M a 6,53x10-10M) para el S, con coeficientes de correlación (R²) de 0,82 y 0,94 respectivamente; el factor de resistencia (FR) fue de 2,82 (Imagen 1).