Determinación del biomarcador tumoral epitelial EpCAM en muestras de pacientes oncológicos mediante un inmunosensor electroquímico con nanopartículas magnéticas como plataforma de inmovilización

Abstract

EpCAM es una proteína de superficie celular que se sobreexpresa en algunos cánceres de origen epitelial como lo son el de pulmón, colorrectal, mama, próstata y el de origen hepático [1]. En los últimos años, anticuerpos contra EpCAM han sido ampliamente utilizados para capturar y cuantificar células tumorales circulantes en pacientes con cáncer de origen epitelial [2]. Por lo tanto, el desarrollo de metodologías analíticas sensibles para la determinación del antígeno EpCAM sería de gran relevancia tanto para el diagnóstico como para monitorear el tratamiento de estos tipos de cánceres. En el presente trabajo se desarrolló un inmunosensor electroquímico para determinar EpCAM en muestras de pacientes con cáncer de mama. La detección de EpCAM se realizó mediante un inmunoensayo competitivo indirecto, donde antígenos de EpCAM fueron inmovilizados sobre nanopartículas magnéticas modificadas con grupos 3-aminopropilos [3] y manipuladas por imanes. Los antígenos EpCAM presentes en la muestra compiten inmunológicamente, por un anticuerpo monoclonal anti EpCAM IgG de ratón, con los antígenos inmovilizados, el cual es detectado mediante un segundo anticuerpo anti-IgG de ratón marcado con la enzima peroxidasa, la que, en presencia de peróxido de hidrógeno, cataliza la oxidación de 4-ter-butil-catecol a 4-terbutil-ortoquinona. Esta última es reducida electroquímicamente en la superficie de un electrodo de láminas impresas de grafito a -0,15 V. La corriente medida es inversamente proporcional a la concentración de antígeno EpCAM presente en la muestra del paciente. El inmunosensor desarrollado mostró elevada sensibilidad, un bajo límite de detección y un tiempo total de análisis menor a 30 min, lo cual podría proporcionar un nuevo enfoque a la detección en el diagnóstico clínico.