El adn libre (cell-free (cf)DNA) como marcador pronóstico en mielofibrosis y su participación en el circuito inflamatorio

Abstract

La Mielofibrosis (MF) es una Neoplasia Mieloproliferativacaracterizada por proliferación clonal de los progenitoreshematopoyéticos, fibrosis medular y riesgo detransformación leucémica. La sobrevida media es de 6años, siendo influenciada por factores clínicos ymoleculares que definen categorías de riesgo. Esinducida por mutaciones driver (JAK2/CALR/MPL) ycooperadoras, que promueven un estado inflamatoriosistémico que contribuye a la patogenia de laenfermedad. El objetivo fue evaluar la utilidad de lamedición del cfDNA como factor pronóstico en pacientescon MF y su contribución al estado inflamatorio. ElcfDNA consiste en pequeños fragmentos de ADNpresentes en la fracción no celular de la sangre. Losniveles de cfDNA, medidos en plasma por fluorimetría,fueron mayores en MF (n=72) vs. Controles (C) (n=35),(P<0.0001, Mann-Whitney), siendo más elevados enpacientes dentro de las categorías de mayor riesgo(escala DIPSS/MIPSS70, P<0.0001). Las MF con cfDNAen los dos cuartiles superiores presentaron con mayorfrecuencia complicaciones clínicas (test de Fisher),como citopenias (P<0.0001), blastos (P<0.0001) ysíntomas constitutivos (P<0.0001), marcadoresgenéticos adversos (P<0.05) y menor sobrevida(P<0.01, Kaplan-Meier). Hubo correlación directa entreel cfDNA y la LDH (P<0.0001, Spearman), marcador decarga tumoral, y la proteína C reactiva (PCR)(P<0.0001), marcador de inflamación sistémica. ElcfDNA posee efectos proinflamatorios siendo uno de susblancos el inflamasoma, complejo multiproteicoresponsable de la maduración y liberación de lascitoquinas proinflamatorias IL-1β e IL-18. Se evaluó laIL-18 circulante (ELISA) encontrándose elevada en MFvs C (P<0.0001), lo que reflejaría la activación in vivo de linflamasoma, presentando estrecha correlación con elcfDNA (P<0.0001). Al igual que el cfDNA, los niveles deIL-18 fueron paralelos al avance de la enfermedad. Se estudió la activación del inflamasoma in vitro enmonocitos ya que son mediadores inflamatorios en laMF. El cfDNA activa específicamente el sensor delinflamasoma AIM2 en diversos tipos celulares, y sereportó que en monocitos activa por una vía alternativaal sensor NLRP3. En primer lugar, se midió la expresión de ambos sensores (qPCR), encontrándose elevado elAIM2 en MF vs C (P<0.0001), siendo más alto en pacientes JAK2+. No hubo diferencias en los niveles deNLRP3. Para estudiar la activación se incubaronmonocitos con polydA:dT (ADN sintético agonista deAIM2) para remedar la acción del cfDNA, nigericinacomo estímulo de NLRP3 y MCC950 (inhibidor especifico de NLRP3), y se midió la liberación de IL-18al sobrenadante. Como resultado, los monocitos de MF liberaron mayores niveles de IL-18 tanto en condiciones basales (P<0.05) como frente a los estímulos (P<0.001polydA:dT, P<0.05 nigericina), reflejando una hiperactivación del inflamasoma. Si bien se encontró una mayor expresión del sensor AIM2, la respuesta exacerbada al polydA:dT fue totalmente bloqueada alinhibir el NLRP3, por lo que en los monocitos el ADN doble cadena estaría actuando vía activación delNLRP3.En conclusión, el aumento de cfDNA en MF y su relación con el grado de severidad de la enfermedad sugiere que este parámetro podría ser de utilidad como factor pronóstico. En conjunto, nuestros hallazgos revelan la participación de un nuevo circuito en el estado proinflamatorio de la MF, conformado por el cfDNA, elinflamasoma NLRP3 y la IL-18, surgiendo posibles blancos terapéuticos.