Desarrollo de una metodología de analisís para carnitina y acetilcarnitina en muestras biológicas

Abstract

Carnitina (C0) es un compuesto que ocurre naturalmente, se sintetiza en riñón, hígado y cerebro y se excreta a través de la orina, pero una gran parte de la misma es nuevamente reabsorbida a través de los túbulos renales. Dada la importancia fundamental de carnitina a través de su función fundamental en la facilitación de la oxidación de los ácidos grasos tanto en la mitocondria como en los peroxisomas, las concentraciones plasmáticas y tisulares de carnitina y sus ésteres derivados, acilcarnitinas, se conservan dentro de límites relativamente estrechos. La homeostasis de carnitina se mantiene gracias al aporte proveniente de la dieta, la biosíntesis de novo y la reabsorción renal. El metabolismo de carnitina se encuentra íntimamente ligado a una gran variedad de trastornos metabólicos, lo cual da lugar a una redistribución de la misma y de sus acilcarnitinas. Consecuentemente, la determinación de estos metabolitos en distintos tipos de fluidos biológicos es un poderoso medio para el diagnóstico y el seguimiento de estos desórdenes. El presente trabajo se basó en el desarrollo de una metodología sensible, selectiva y novedosa para la resolución cromatográfica y determinación cuantitativa de carnitina y acetilcarnitina (C2) mediante cromatografía de interacción hidrofílica (HILIC) asociada a ionización por electrospray-acoplada a un detector de masas de tipo triple cuadrupolo operado en modo de monitoreo de reacción múltiple (MRM). Se optimizaron las diversas variables relacionadas a la limpieza y acondicionamiento de las muestras de suero y orina, conjuntamente con los parámetros operativos de separación y detección. Las muestras fueron inyectadas en la columna mencionada que resolvió los metabolitos a diferentes tiempos y en menos de 3 minutos. Posteriormente, los mismos fueron identificados y cuantificados empleando los siguientes fragmentos de los iones precursores de m/z 162 y 204 para carnitina y acetilcarnitina; respectivamente: 103u (ion de cuantificación de C0), 145u. (ion de cuantificación de C2), 85u. y 60u. (iones de confirmación, comunes para ambos analitos). Adicionalmente, se evaluó el efecto de la matriz de las diversas muestras sobre la ionización de C0 y C2, se validó la metodología y se obtuvieron las figuras de mérito correspondientes. Finalmente, se llevó a cabo su aplicación, obteniéndose niveles de concentración de carnitina y acetilcarnitina en el orden micromolar, hecho que concuerda satisfactoriamente con lo reportado por otros autores y permite la obtención de conclusiones de interés metabólico