Determinación de Benznidazol en orina humana mediante UHPLC-MS/MS

Abstract

La enfermedad de Chagas es una enfermedad potencialmente mortal causada por el parásito protozoo Trypanosoma cruzi. Su distribución geográfica es muy amplia, con características endémicas en América del Sur y aunque la forma histórica de transmisión ha sido rural y vectorial (a través de la vinchuca) hoy en día es prevalente la infección urbana y congénita (madre-hijo). En la actualidad, los fármacos utilizados para su tratamiento son benznidazol (BNZ) y nifurtimox [1, 2]. Las propiedades farmacológicas de los mismos, en particular para BNZ, aún no han sido estudiadas en detalle y la información disponible sobre su farmacocinética y posología en lactantes, niños, ancianos y mujeres embarazadas es casi inexistente. Además, su administración requiere de periodos prolongados con efectos de toxicidad significativa, especialmente en adultos [3, 4]. En consecuencia, el desarrollo de metodologías de análisis que permitan la determinación cuantitativa sensible de BNZ en muestras biológicas es de gran importancia para generar protocolos de tratamiento racionales que maximicen las probabilidades de respuesta terapéutica y, al mismo tiempo, disminuyan el riesgo de eventos adversos. En la actualidad, existen muy pocos métodos para el análisis de BNZ, pero ninguno basado en separación cromatográfica asociada a espectrometría de masas. En este trabajo se desarrolló una metodología de limpieza de la muestra de orina basada en la extracción líquido-líquido de BNZ previo a su inyección al sistema de cromatografía líquida de alta resolución (UHPLC) y detección/cuantificación por espectrometría de masa en tándem (MS/MS). La separación se realizó en una columna C18 de rápida resolución, empleando elución en gradiente con un tiempo de retención de 2.89 minutos. Se evaluó el efecto de la matriz biológica de orina sobre la ionización de BNZ, observándose un supresión de la señal de aproximadamente un 90%. En consecuencia, la cuantificación del analito se realizó mediante el método de adición estándar. La metodología fue validada a través de estudios de recuperación. El límite de cuantificación obtenido permitió la determinación de concentraciones nanomolares de BNZ. La metodología se aplicó exitosamente a muestras de orina pediátrica y de adultos, obteniéndose resultados preliminares acerca de la excreción de la droga en orina e información valiosa para el desarrollo de un tratamiento racional de la enfermedad de Chagas.