Efecto del Naf sobre la infección del fago Stx2 ArgO145

Abstract

Las toxinas Shiga (Stxs) son consideradas el principal factor de virulencia de STEC y responsables de las característicaspatológicas como también de las complicaciones severas de la infección. Están codificadas por bacteriófagos(fagos Stx), los cuales juegan un rol importante en la regulación de la producción de toxina, en ladiseminación de los genes stx y en la emergencia de nuevas cepas STEC. Análisis bioinformáticos de genomasde fagos Stx2a mostraron que la región donde se encuentra localizado el gen stx es muy conservada y codifica,adyacente a stx2a, una sialato O-acetil esterasa denominada NanS-p. Ensayos previos en nuestro laboratoriomostraron que la expresión de nanS-p se incrementa en respuesta a la inducción con mitomicina C, de manerasimilar a stx2a. El objetivo de este trabajo fue evaluar el efecto del NaF, inhibidor de algunas esterasas, en lainfección de los fagos Stx2a. Se seleccionó el fago ArgO145, el cual fue aislado a partir de una cepa STEC O145,secuenciado y caracterizado en estudios previos. Se generó un lisógeno utilizando la cepa E. coli WG5 comohospedadora y se evaluaron concentraciones de NaF que no tuvieran efecto negativo sobre el crecimiento deE. coli WG5. Se cultivó la cepa lisógena en caldo LB con mitomicina C. Los sobrenadantes filtrados (poro de0,22 μm) del cultivo se incubaron 1:1 con NaF 1M (o agua como control negativo) y se titularon los fagos medianteel ensayo de doble capa de agar. Los resultados mostraron una marcada disminución en el título de fagosincubados con NaF. El efecto del NaF podría estar asociado a la inhibición de la actividad de NanS-p, por locual se requieren estudios específicos que determinen si NanS-p cumple un rol en la infección de fagos Stx2a.