Puesta a punto de ensayos de estandarización en cepas de Streptococcus agalactiae

Abstract

Streptococcus agalactiae es uno de los patógenos más frecuentemente asociado con la mastitis bovina. Esta bacteria puede colonizar el epitelio mamario y producir factores de virulencia que afectan la función fisiológica de las células epiteliales, implicándose en la invasión, adhesión y respuesta inmunitaria. En la patogenia de la infección por S. agalactiae existen dos pasos críticos: la adhesión y la invasión de las células del huésped. Dado que no hay estudios que caractericen estos procesos y que es necesario estandarizar previamente las cepas para realizar estos ensayos, el objetivo fue poner a punto la técnica de estandarización para posteriormente estudiar la interacción S. agalactiae con las células epiteliales mamarias y así, en el futuro, proponer terapias para impedir o mitigar la infección por este patógeno. Se seleccionaron 11 cepas de S. agalactiae aisladas de vacas lecheras con mastitis de la Cuenca Mar y Sierras. A partir de las cepas congeladas, se realizó un cultivo overnight en caldo Todd Hewitt por 18 h a 37 ºC, bajo agitación y en condiciones de microaerofilia. Luego, se realizó una siembra por agotamiento en agar cromogénico para obtener colonias aisladas. Posteriormente, se realizó otro cultivo overnight a partir de una colonia por 18 h a 37ªC, en agitación y en microaerofilia. El cultivo se ajustó a una densidad óptica de 0,5 en la escala de Mc Farland y se realizaron diluciones seriadas, sembrando 3 gotas de 5 ul de cada dilución en agar tripteina soja. Las placas se incubaron por 24 h a 37 ºC y se realizó el recuento de colonias por gota, en un rango de 3-30 colonias. Los resultados del recuento se expresaron en unidades formadoras de colonias, UFC/ml, según la dilución. La puesta a punto del ensayo resultó exitosa, ya que se lograron estandarizar las 11 cepas seleccionadas. Los valores obtenidos, expresados en UFC/ml, oscilaron entre 8,8 x 105 a 4 x 106, con un promedio de 2,2 x 106. Estos resultados son indispensables para luego poder calcular la multiplicidad de infección (MOI), dato necesario en los ensayos de adherencia e internalización.