Capacidad de replicación in vitro de miembros de la familia Orthoherpesviridae en presencia de plasma rico en plaquetas y suero fetal bovino

Abstract

Los ortoherpesvirus incluyen los géneros Varicellovirus y Rhadinovirus, que comprenden a los virus BoAHV-1 y BoGHV-4 respectivamente. Estos virus tienen gran relevancia debido a su impacto en la salud de los bovinos, afectando tanto la producción como la reproducción [1,2]. El plasma rico en plaquetas (PRP) presenta propiedades inmunomoduladoras y regenerativas debido a su enriquecimiento en factores de crecimiento con potencial mitogénico y antiinflamatorio [3]. Por otro lado, el suero fetal bovino (SFB) es un suplemento esencial en cultivos celulares por su riqueza nutritiva. Dilucidar cómo estos componentes afectan la replicación viral podría proporcionar nuevas perspectivas para el desarrollo de terapias antivirales y mejorar las estrategias de las infecciones ocasionadas por virus. Por lo tanto, en este estudio se analizó la cinética de replicación intra y extracelular de BoAHV-1 y BoGHV-4 en presencia de PRP y se comparó con SFB al mismo porcentaje (10%). Para ello, se utilizaron líneas celulares susceptibles a la infección por ortoherpesvirus, células renales bovinas Madin-Darby (MDBK) y células endometriales bovinas derivadas de cultivos primarios (BEC) cultivadas con medios suplementados con PRP y SFB (10%). Se utilizaron la cepa de referencia BoAHV-1 LA38 y la cepa de campo BoGHV-4 07/435. Se recolectaron sobrenadantes y células a las 12, 24 y 48 horas post-infección (hpi) para la titulación del virus utilizando el método de titulación por punto final. Se utilizó un modelo factorial, en función del tiempo y el tratamiento, para probar la hipótesis de “ausencia de interacción”. Los títulos virales (TV) se ajustaron a modelos de regresión polinómica. La replicación viral extracelular de la cepa LA38 fue menor en ambos cultivos celulares suplementados con PRP, con diferencias significativas (p>0.05) observadas de 1 log a las 48 hpi en células MDBK y 0.5 log a las 24 hpi en células BEC. En contraste, los TV extracelulares de la cepa 07/435 no se vió afectado por la presencia de PRP en las células BEC. Esto podría estar indicando que la presencia del PRP no modifica significativamente la replicación viral en estas células. Sin embargo, en las células MDBK, los TV disminuyeron significativamente (p>0.05) con una magnitud de 3.7 log con el PRP a las 48 hpi y aumentaron 1.4 log a las 72 hpi en comparación con el SFB. Este patrón inicial de inhibición seguido de aumento en la replicación viral sugiere una respuesta dinámica y adaptativa del virus al PRP. En cuanto a la replicación intracelular de la cepa LA38, se observó una disminución significativa (p>0.05) del TV de 1.5 log de magnitud en presencia de PRP a las 48 hpi en células MDBK, lo que podría indicar una posible inhibición viral por el PRP o facilitación por el SFB. En células BEC, se detectaron diferencias significativas menores (p>0.05) en todos los tiempos evaluados con PRP: 0.3 log a las 24 hpi, y 0.7 log a las 48 y 72 hpi. Es importante destacar que, en ambos cultivos, los TV intracelulares con PRP fueron más bajos que con SFB, excepto a las 48 hpi. Estos hallazgos sugieren un efecto inhibitorio del PRP sobre la replicación viral en comparación con el SFB. La excepción observada a las 48 hpi en células MDBK podría deberse a una interacción específica entre el PRP y los mecanismos de replicación viral, lo cual requiere un análisis más exhaustivo. Se observó una tendencia similar en el título viral de la cepa 07/435 en ambos cultivos celulares (MDBK y BEC), siendo siempre más bajos en presencia del PRP, esto sugiere un efecto inhibitorio sobre la replicación viral de esta cepa en ambos tipos de células estudiadas, salvo en momentos específicos donde se registraron diferencias significativas. En células MDBK, estas diferencias fueron significativas (p>0.05) a las 24 hpi, mientras que en células BEC ocurrieron a las 24 y 72 hpi, posiblemente relacionado con distintas fases del ciclo viral donde el PRP podría tener un impacto variable. Estos resultados subrayan la importancia de entender cómo los componentes del medio de cultivo pueden influir en la dinámica de replicación viral, lo cual es crucial para el desarrollo de estrategias antivirales y para optimizar la producción de cultivos celulares en la investigación biomédica y veterinaria.