Cannabis sativa con efecto antihelmíntico: Primeros ensayos sobre el desarrollo embrionario del nematode canino Toxascaris sp.

Abstract

Los antecedentes en Gral. Pueyrredon denotan que existe un elevado riesgo de transmisión de nematodes parásitos zoonóticos a través del ambiente, que se vuelve más relevante cuando las condiciones de vida son deficientes. En la búsqueda de posibles estrategias para disminuir la transmisión de estos parásitos, surge el uso de derivados de Cannabis sativa que se ha estudiado por su potencial antimicrobiano. Dos de sus principales cannabinoides son el delta-9-tetrahidrocannabinol (THC) y el cannabidiol (CBD). Según la relación entre ambos compuestos, las plantas se dividen en tres quimiotipos (Q): QI > THC; QII con similares proporciones y Q III > CBD. Teniendo en cuenta el potencial de los principios activos del Cannabis y que la transmisión de los parásitos nematodes de caninos se da por medio de los huevos, el objetivo del este trabajo fue analizar el potencial antihelmíntico del QIII de una variedad local de Cannabis sativa, sobre el desarrollo embrionario del nematode canino Toxascaris sp.Se realizaron ensayos de embriogénesis de huevos de Toxascaris sp. obtenidos de una hembra enviada por el Dpto. de Zooantroponosis, Sec. de Salud de Chubut. En una placa multiwell de fondo plano de 24 pocillos se sembró una suspensión de huevos de Toxascaris sp. en PBS 1X, para realizar por triplicado 4 tratamientos con extracto de cannabis (EC) en solución con DMSO 0,5% (1000 µg/ml, 500 µg/ml, 250 µg/ml y 100 µg/ml), y 2 controles de DMSO 0,5% y PBS 1X. Las placas se incubaron en estufa a 30 °C durante 14 días y se observaron al microscopio invertido cada 4 días para monitorear el desarrollo. Al finalizar el ensayo, se contó el n° total de huevos en cada pocillo teniendo en cuenta aquellos con desarrollo completo de la larva L1. Se calculó la frecuencia de huevos no larvados para cada réplica y se realizó el test de ANOVA de un factor seguido por el test de Tukey (p < 0.05). Se calculó el % de inhibición de la embriogénesis de los tratamientos con respecto al control de PBS 1X.Si bien los 4 tratamientos con EC evidenciaron mayores frecuencias (%) de huevos no larvados de Toxascaris sp. en comparación con los controles, las concentraciones de EC de 1000 µg/ml y 100 µg/ml mostraron diferencias significativas con respecto a las demás concentraciones y los controles, con frecuencias del 78,57 ± 6,18 % y del 70,44 ± 2,8 % respectivamente. Asimismo, estas concentraciones mostraron % de inhibición de la embriogénesis del 48% y del 33% comparadas con el control de PBS 1X. Estos ensayos permitieron poner a punto una técnica de cultivo de huevos de ascaridios para realizar las primeras pruebas con EC. Si bien es necesario seguir ajustando la técnica con respecto a las concentraciones y los solventes utilizados, este EC presentaría cierto potencial antihelmíntico ya que se observó inhibición del desarrollo larvario de Toxascaris sp., afectando la infectividad de los huevos que constituyen las estructuras de transmisión de estos nematodes zoonóticos.