Uso de distintos desinfectantes superficiales para el establecimiento in vitro de segmentos nodales de Grevillea robusta

Abstract

La contaminación microbiana es un problema constante quecompromete el desarrollo de todas la técnicas in vitro. Las pérdidascausadas por microorganismos contaminantes principalmentehongos y bacterias constituyen un serio problema a escalamundial en los numerosos laboratorios. Por ello para determinarun protocolo de desinfección de segmentos nodales de Grevillearobusta provenientes de brotes recolectados de plantas mantenidasen invernadero, se ensayaron diferentes soluciones de desinfectante(hipoclorito de sodio, peroxosulfato acido de potasio,peróxido de hidrogeno, y dos fungicidas, oxicloruro de cobre ycarbendazim), en distintas concentraciones (de 0,5 a 10 g. L-1) ytiempos de exposición (15, 30 o 60 minutos). Los explantesfueron cultivados en un medio basal de Murasghige y Skoog. Alos 28 días de cultivo, se determinó porcentaje de contaminación,oxidación y supervivencia/establecimiento de los explantes.Si bien todos los tratamientos ensayados han permitido elestablecimiento de los cultivos entre un 36,67± 5,77 y un90,00±10 %; los mejores resultados se obtuvieron con un pre-tratamiento de NaClO 0,25 g. L-1 y Carbendazim 0,75 g. L-1 por15 minutos recomendándolo para un establecimiento exitoso,con un porcentaje de contaminación mínimo y un efecto fitotóxicoen cuanto a ennegrecimiento u oxidación de los tejidos, dentrode los parámetros razonables.

Microbial contamination is a constant problem, which often compromises development of all in vitro techniques. The losses caused by contaminating microorganisms, mainly fungi and bacteria, are a serious worldwide problem in numerous laboratories. Thereby, to determine a protocol for the disinfection of nodal segments of Grevillea robusta from sprouts collected from greenhouse plants, different disinfectant solutions were tried (sodium hypochlorite; potassium hydrogen persulfate; hydrogen peroxide; and two fungicides, copper oxychloride and carbendazim), using different concentrations (between 0.5 and 10 g. L-1) and times of exposure (15, 30, and 60 minutes). The explants were cultivated in a basal medium of Murasghige and Skoog. At 28 days of culture, the percentages of contamination, oxidation and survival/establishment of all the explants were determined. Even though all treatments tested allowed establishment between 36.67± 5.77 and 90.00±10 %, the best results were obtained with a pretreatment using NaClO 0.25 g. L-1 and Carbendazim 0.75 g. L-1 for 15 minutes. Thus, this pre-treatment is recommended for a successful establishment, with a minimum percentage of contamination, and phytotoxic effects of blackening or tissue oxidation within reasonable parameters