Análisis de desbalances genómicos del locus PD-L1/PD-L2 en pacientes con linfoma de Hodgkin clásico

Abstract

El estudio del linfoma de Hodgkin clásico (LHc) resulta de gran interés debido a la heterogeneidad que lo caracteriza. Las células de Reed Sternberg/Hodgkin (RS/H) se presentan alteraciones cromosómicas que reflejan inestabilidad genómica, anomalías que también han sido observadas en las células del microambiente tumoral. La vía de señalización PD-1 (programmed death-1) (2q37) y sus ligandos PD-L1 (CD274) y PD-L2 (PDCD1LG2), ambos ubicados en el locus 9p24.1, participa en el mantenimiento de la tolerancia y el control de la respuesta inmune, en tanto que su activación favorecería la progresión neoplásica, mecanismo asociado a la presencia de alteraciones genómicas.Objetivo: El objetivo del presente trabajo es caracterizar los desbalances genómicos a nivel del locus 9p24.1 en biopsias de pacientes con LHc, tanto en las células RS/H como en las del microambiente tumoral y correlacionarlo con el nivel de expresión proteica. Materiales y Métodos: Se evaluaron en forma retrospectiva 22 biopsias de pacientes con LHc al diagnóstico, fijadas en formol y embebidas en parafina (11 varones; edad media 31 años; rango: 18-53 años). El estudio fue aprobado por el Comité de Ética de los Institutos de la Academia Nacional de Medicina. Se realizó técnica de FISH con sonda SPEC CD274/PDCD1LG2/CEN9 (ZytoVision, Alemania). Se determinó el número de copias del locus PD-L1/PD-L2 en relación al centrómero del cromosoma 9 (Cr9) clasificándolas como: amplificación (A) (≥3 copias del gen en estudio respecto al número de marcas centroméricas: ratio ≥3:1), ganancia (G) (ratio <3:1 pero >1:1) y polisomía (P) (ratio 1:1). Se evaluaron 3 casos de linfadenitis reactivas, a fin de determinar el punto de corte para la detección de monosomía del Cr9 en células del microambiente tumoral (media + 3 desvíos estándar: 20%). Se efectuó inmuno-marcación con el anticuerpo anti-PD-L1/CD274 (clon RBT-PDL1, Rmab, BioSB) para evaluar el nivel de expresión proteica en células de RS/H, siendo grado +3 el máximo nivel.Resultados: El análisis de las células de RS/H mostró alteraciones en el número de copias del locus PD-L1/PD-L2 en el 100% de los casos, pudiendo diferenciarse dos grupos citomoleculares: A/G/P con amplificación (7/22; 32%) y G/P con ganancia (15/22; 68%). Dentro de este último se observó un 53% de casos con >50% de células con G, en tanto que el 47% restante estaba por debajo de dicho porcentaje. Los pacientes del grupo A/G/P mostraron menor edad (26±7,42 años) que el G/P (34,07±9,07) (p=0,054), alcanzando valores significativos al comparar A/G/P vs G/P con <50% de G (37,71±11 años) (p=0,038) así como la asociación de los grupos A/G/P+G/P con >50% de G (28,6±6,93 años) vs G/P con <50% de G (p=0,027). Asimismo, encontramos presencia de masa Bulky mediastinal en el 40% (6/15) de los casos del grupo A/G/P+G/P con >50% de G, manifestación no observada en el grupo G/P con <50% de G. El análisis por inmunohistoquímica mostró expresión proteica de PD-L1 en 21/22 casos (95,4%). Se observó grado +3 de expresión en el 22,7% (5/22) de los casos, 4 pertenecientes al grupo A/G/P y 1 a G/P con >50% de G, sin casos con máxima expresión en el grupo G/P con <50% de G. Por otra parte, el análisis de los linfocitos T pequeños del microambiente tumoral, circundantes a las células RS/H, mostró monosomía del Cr9 en el 53% de los pacientes. Esta alteración se encontró significativamente asociada al grupo G/P con <50% de G (100% de los casos) respecto del A/G/P+G/P con >50% de G (36,3%) (p=0,028). Conclusiones: Nuestros resultados muestran que la amplificación de PD-L1-PD-L2 se asocia a una menor edad de inicio de la enfermedad, presencia de masa Bulky mediastinal, aumento de la expresión proteica de PD-L1 y menor inestabilidad genómica en las células del microambiente tumoral, constituyendo un aporte a la caracterización biológica del LHc.