Cambios bioquímicos en el citoplasma de ovocitos bovinos madurados in vitro en medio suplementado con VEGF-D

Abstract

La maduración in vitro (MIV) es una técnica de reproducción asistida, ampliamente utilizada con el propósito de incrementar la reproducción de animales. Lógicamente, aún presenta limitaciones que afectan su eficiencia en la obtención de ovocitos competentes para la fecundación cuando se compara con el proceso de maduración in vivo. Es por ello que la optimización de los medios cultivo mediante el agregado de moléculas específicas es un campo de investigación activo que busca aumentar la tasa de maduración efectiva. El objetivo de este trabajo es evaluar por microscopía Raman el impacto del agregado del factor de crecimiento endotelial vascular-D (VEGF-D) al medio de cultivo en el perfil bioquímico del citoplasma de ovocitos bovinos madurados in vitro.Los espectros Raman se tomaron del citoplasma de ovocitos que fueron sometidos al proceso MIV durante 18 y 22 h en ausencia (medio de cultivo convencional, usado como control; grupos 18H-C y 22H-C, respectivamente) y en presencia del factor de crecimiento (medio de cultivo enriquecido con VEGF-D; grupos 18H-F y 22H-F, respectivamente). Para un análisis más preciso de los cambios citoplasmáticos, se eliminó la zona pelúcida de los ovocitos mediante digestión enzimática. El espectro promedio del grupo de ovocitos 18H-F mostró un marcado aumento en las intensidades de las bandas características de proteínas y azúcares con respecto al espectro representativo del grupo control 18H-C. El espectro promedio de los ovocitos que completaron el tiempo de maduración (22 hs.) en presencia del factor, 22H-F, también evidenció intensificaciones de las bandas de ambos biocomponentes con respecto al control (22H-C), pero en menor magnitud que a las 18 hs. Para ambos tiempos de maduración, no se detectaron cambios en las bandas lipídicas.El análisis espectral se complementó con análisis estadístico multivariado de componentes principales (ACP), aplicado a las bandas que mostraron mayor diferencia espectral. Se observó que los ovocitos de los grupos 18H-F y 22H-F presentan valores de componentes principales más próximos entre sí que los ovocitos tratados en medio convencional, los que se caracterizan por una mayor variabilidad en los datos espectrales (Jimenez 2022). Los resultados obtenidos confirman que la suplementación del medio de maduración con VEGF-D produce intensificación de los principales biocomponentes del citoplasma de los ovocitos bovinos y, por tanto, podría tener un impacto favorable en el rendimiento de la MIV.