Formación de biofilms por aislamientos de Streptococcus uberis obtenidos de vacas lecheras con mastitis de la Cuenca Mar y Sierras

Abstract

Streptococcus uberis es uno de los patógenos ambientales más prevalentemente aislado de mastitis bovina clínica y subclínica. Las infecciones por S. uberis pueden persistir en la vaca muchos meses, tanto durante los períodos de lactancia como fuera de ellos y durante el tratamiento antimicrobiano. Una de las principales razones de la recurrencia de la infección es la formación de biofilm. La capacidad de formar biofilms es importante tanto desde el punto de vista de la patogenicidad para el animal como del de la industria láctea, ya que el patógeno puede adherirse a estructuras abióticas de elaboración de alimentos y persistir en el ambiente. El desarrollo y el establecimiento de los biofilms dependen de la capacidad del patógeno para adherirse a las células epiteliales mamarias bovinas y a superficies abióticas. S. uberis posee varios factores de virulencia que le permiten unirse a las células epiteliales mamarias, entre ellas, la proteína Suam. El objetivo de este trabajo fue evaluar la capacidad de aislamientos de S. uberis obtenidos de mastitis bovina de la Cuenca Mar y Sierras de formar biofilm in vitro.Se analizaron 90 aislamientos de S. uberis obtenidos de 23 tambos de la Cuenca Mar y Sierras (Provincia de Buenos Aires), identificados mediante pruebas bioquímicas y confirmado por la amplificación del gen pauA. La formación de biofilms se analizó utilizando placas de micro titulación de polietileno de 96 pocillos con fondo plano. Los aislamientos de S. uberis se cultivaron durante la noche en caldo Todd Hewitt a 37˚C y se realizaron diluciones del cultivo llevándolo a una DO600=0,5. Una alícuota de cada dilución se sembró en 190 µl de caldo Luria Bertani suplementado con 1% de glucosa y se incubó a 37˚C. Tras 48hs de crecimiento, se realizó la tinción con 0.1% de cristal violeta, luego se procedió a la lectura de las placas a DO570nm, utilizando un lector de microplacas LabSystems Multiskan EX. La densidad óptica de cada aislamiento se obtuvo mediante la media aritmética de la absorbancia de tres pocillos y este valor se comparó con la absorbancia media de los controles negativos. Los aislamientos se clasificaron como: no formadores de biofilm, DOa < DOc; débiles formadores de biofilms, DOc < DOa ≤ 2 DOc; moderados formadores de biofilms, 2 DOc < DOa ≤ 4 DOc, o fuertes formadores de biofilms, 4 DOa < 4 DOc, siendo DOc= corte y DOa=ajustada.El 43,5% de los aislamientos fueron fuertes formadores de biofilms, el 10%, moderados formadores de biofilms, el 22,1%, débiles formadores de biofilms y el 24,4%, no formaron biofilms in vitro. La capacidad de producir biofilms proporciona a la bacteria subsistencia y protección, dificultando su eliminación y aumentando la resistencia a los antibióticos. Los resultados mostraron que una gran proporción de las cepas de esta región tienen la capacidad de formar biofilms y, heterogeneidad en cuanto a ello.