Aislamiento de cepas de Lactobacilos vaginales y evaluación de la actividad antagonista frente a patógenos urogenitales

Abstract

La microbiota vaginal humana sana, caracterizada por el predominio de Lactobacillus spp., juega un rol importante en el mantenimiento de la salud femenina. La administración, por vía vaginal u oral, de lactobacilos y/o de sus metabolitos se propone como un tratamiento alternativo o complementario a los antibióticos y antimicóticos, con efectos beneficiosos sobre las infecciones genitourinarias recurrentes. Los objetivos de este trabajo fueron aislar e identificar cepas de lactobacilos a partir de muestras de exudados vaginales de mujeres sanas y caracterizarlas funcionalmente, para su potencial incorporación en alimentos y suplementos probióticos. Se aislaron 23 cepas a partir de muestras de exudados vaginales de mujeres sanas y se realizó la identificación genética por secuenciación parcial del gen 16S ARNr, identificándose dentro de las especies: Lactobacillus gasseri (13), L. crispatus (9) y L. jensenii (1). Para evaluar la funcionalidad in vitro de las cepas se determinó la capacidad acidificante y la actividad antagonista contra patógenos urogenitales. En relación a la capacidad acidificante, se midió el pH del sobrenadante libre de células (SLC) y la concentración (g/L) de ácido láctico mediante HPLC. Los lactobacilos fueron cultivados overnight en caldo MRSc (anaerobiosis, 37°C, 22 hs) y centrifugados (4000 g, 20 min, 8°C). El pH varió entre 3,98 ± 0,02 (L. gasseri I2) y 4,24 ± 0,02 (L. crispatus M12a). En todos los SLC se detectó ácido láctico, con valores entre 7,90 ± 2,69 (L. gasseri I30b) y 17,85 ± 2,05 (L. jensenii M15a). La actividad antagonista se evaluó frente a Escherichia coli ATCC 25922, Candida albicans ATCC 10231, C.glabrata ATCC 90030, C. parapsilosis ATCC 2219, C. krusei ATCC 6258 y Gardnerella vaginalis (aislamiento clínico). Se llevó a cabo spot test, evaluando la inhibición del crecimiento de los patógenos mencionados (7 log UFC), en presencia de cultivos overnight de los lactobacilos. Las cepas más inhibitorias de E. coli fueron L. gasseri I28, L. crispatus M32b y L. gasseri M43 (12 mm) y las de G. vaginalis fueron L. gasseri I18 y L. crispatus M32b (10 mm). Se utilizó el probiótico L. rhamnosus GG como control positivo de inhibición, mostrando halos de igual longitud a los de las cepas mencionadas, en cada caso. Ninguna de las cepas mostró halos de inhibición sobre las 4 especies de Candida. Paralelamente, se evaluó la capacidad de inhibir la formación de hifas en C. albicans. L. crispatus M30 presentó la mayor capacidad inhibitoria (proporción hifas / células = 0,56 ± 0,01); L. rhamnosus GG mostró una proporción hifas / celúlas = 0,28 ± 0,06. Este trabajo proporciona una caracterización inicial de nuevos lactobacilos, aislados de fuente no convencional, para su potencial uso como probióticos. En particular, la capacidad acidificante y su actividad antagonista contra patógenos urogenitales, indican que estas cepas son candidatas interesantes para la prevención y/o terapia de la salud femenina. Es menester profundizar en la evaluación funcional de las mismas y complementar con la caracterización tecnológica, en vista de su utilización a nivel industrial.