Desarrollo de un inmunosensor nanoestructurado electroquímico aplicado a la detección precoz de Aspergilosis invasiva

Abstract

Se denomina aspergilosis invasiva a todas aquellas enfermedades producidas por diversas especies del hongo Aspergillus habitualmente por inhalación de sus esporas [1]. Esta enfermedad es muy difícil de diagnosticar. Es los últimos años, ha sido de gran utilidad diagnóstica la detección serológica de galactomananos (GMN), componente polisacárido de la pared celular de Aspergillus sp. que se libera durante la invasión tisular [2]. Actualmente, este antígeno se determina mediante un ELISA comercial (Platelia®Aspergillus, Bio-Rad, Francia) en microplaca [1, 2]. En el presente trabajo presentamos un inmunosensor nanoestructurado con detección electroquímica aplicado a la determinación de galactomananos en muestras de suero humano. Éste se basa en el uso de nanopartículas de cobre (CuNPs) sintetizadas por reducción química recubiertas por polivinilpirrolidona (PVP). Las CuNPs-PVP fueron empleadas como plataforma para la inmovilización de anticuerpos monoclonales anti-GMN, quienes reaccionarán específicamente con el antígeno GMN presente en muestras de suero. Posteriormente, la cantidad de GMN que reaccionó fue cuantificado por un segundo anticuerpo anti-GMN marcado con la enzima peroxidasa (HRP), la que, en presencia de peróxido de hidrógeno, cataliza la oxidación de 4-ter-butil-catecol a 4-terbutil-ortoquinona. Esta última es reducida electroquímicamente en la superficie de un electrodo de oro a -0,10 V. La corriente medida es directamente proporcional a la concentración de GMN presente en la muestra del paciente. Por otra parte, las CuNPs-PVP sintetizadas fueron caracterizadas por microscopía electrónica de barrido (Fig. 1), detección de energía dispersiva (Fig. 2) y espectroscopía infrarroja transformada de Fourier (Fig. 3). Los límites de detección para el método propuesto y un ELISA comercial que se utilizó para validar nuestro desarrollo fueron de 0,23 y 1 ng mL-1, respectivamente y los coeficientes de variación para los ensayos intra e inter día fueron menores que 6,33%.Finalmente, el inmunosensor desarrollado es simple de utilizar, sensible, específico, reproducible y promete ser un método fiable para el diagnóstico precoz clínico.