Evaluación de la especificidad de anticuerpos policlonales aviarios y mamíferos anti-Factor Precoz de Preñez porcino

Abstract

El EPF es una proteína con propiedades inmunomoduladoras y reguladoras del crecimiento, presente en el suero de los animales durante la gestación. Es un marcador temprano de viabilidad embrionaria durante la fase peri-implantacional. La obtención de anticuerpos(Acs) anti-EPF nos permitiría contar con una valiosa herramienta para investigar las funciones biológicas de este factor. No se ha logrado obtener Acs monoclonales anti-EPF debido a su función como factor de crecimiento autócrino para los hibridomas. La distancia filogenética que existe entre las aves y los mamíferos resulta potencialmente ventajosa para la producción de un alto porcentaje de Acs específicos contra antígenos mamíferos. El objetivo de este trabajo fue la obtención de Acs policlonales anti-EPF porcino aviarios y de mamífero, comparando la producción y la especificidad de cada lote de anticuerpos. Se inmunizaron gallinas y conejos con un péptido sintético de EPF o con la banda de 29 kDa aislada por SDS-PAGE proveniente de suero de una cerda de 7 días de gestación. Las IgY aviarias anti-EPF se purificaron por el método de precipitación con ácido caprílico y polietilenglicol 6000, y las IgG anti-EPF de conejo por precipitación salina con sulfato de amonio. El rendimiento proteico fue evaluado por Bradford y la especificidad de los Acs por “Dot Blot” e Inmunoblot. El rendimiento proteico fue satisfactorio en todos los lotes de Acs. El lote de Acs obtenidos en conejos inmunizados con el péptido sintético presentó especificidad satisfactoria. Los lotes obtenidos en conejos y gallinas inmunizadas con la banda de SDS-PAGE de 29 kDa presentaron baja especificidad, mientras que el lote obtenido en gallinas inmunizadas con el péptido sintético presentó nula especificidad. El péptido sintético de EPF indujo la producción de Acs más específicos en conejos, pero la banda de 29 kDa de SDS-PAGE no es adecuada para obtener Acs específicos contra este factor dado que además del EPF reconoce otras proteínas presentes en el suero.

Early Pregnancy Factor (EPF) is a secreted protein with known functions as immunomodulator and growth factor, released very early in mammalian gestation. EPF represents an early marker of gestation and a very useful tool to supervise embryonic viability during the peri-implantational period. Obtaining anti-EPF antibodies (Abs) would mean having a valuable tool to investigate the biological functions of this factor, but it has failed so far due to EPF´s function as an autocrine growth factor for hibridomas. The phylogenetic distance between birds and mammals is potentially advantageous for the efficient production of specific Abs against mammalian antigens. Thus, the objective of this work was to obtain avian and mammalian polyclonal anti-porcine EPF Abs and to evaluate the protein yield and the specificity of each batch of antibodies. Hens and rabbits were immunized with a synthetic EPF peptide, or with EPF isolated and purified from porcine serum of 7 days of gestation by SDS-PAGE (29 kDa band). IgY anti-EPF antibodies from hens were purified by combined caprylic acid and polyethylene glycol 6000 precipitation, and rabbit anti-EPF IgG by sulphate ammonium precipitation. Protein yield was evaluated by Bradford, and Ab specificity by Dot Blot and Immunoblot. The protein yield was satisfactory in all batches of Abs. The specificity of Abs obtained from rabbits immunized with the synthetic EPF peptide was satisfactory. Batches of immunoglobulins obtained from rabbits and hens immunized with the SDS-PAGE 29 kDa band displayed low specificity, whereas the batch obtained from hens immunized with the synthetic peptide presented null specificity. The synthetic peptide induced the production of more specific Abs when they were raised in rabbits. In contrast, the SDS-PAGE 29 kDa band is not useful to obtain specific Abs against this factor, since in addition to EPF it recognizes other proteins present in the serum.