Caracterización de poblaciones de linfocitos T con especificidad por epítopes de Trypanosoma cruzi identificados mediante predicción bioinformática

Abstract

En un trabajo previo identificamos, mediante predicción bioinformática y validación in vitro, 7 secuencias peptídicas de T. cruzi que contienen epitopes activadores de secreción de IFN-γ en linfocitos T CD4+ y CD8+ de pacientes con enfermedad de Chagas crónica. Esta respuesta mostró indicios de restricción por haplotipo de HLA expresado por los pacientes. Los alelos de HLA utilizados en la predicción fueron seleccionados en función de su prevalencia en latinoamérica (HLA-A y -B) y mundial (HLA-DRB1).En esta nueva etapa de nuestra investigación, caracterizamos por secuenciación el locus de HLA en los 50 pacientes de la cohorte (26 asintomáticos, 25 con cardiopatía chagásica) y comparamos los resultados con la lista de variantes utilizada para la predicción original. Los resultados pusieron de manifiesto discordancias entre las variantes de prevalencia regional y las encontradas en la muestra poblacional, resaltando la necesidad de implementar este tipo de caracterización en la población endémica para este mal. No obstante, solo 1/51 pacientes no expresa ningún alelo de la lista.La información de la secuenciación, combinada con los resultados de ELISPOT para IFN-γ obtenidos en la etapa anterior de este proyecto, se utilizó para sintetizar multímeros de HLA-A*31:01 cargados con el epitope mínimo predicho para el péptido #47 (cruzipaina) y de HLA-DRB1*07:01 con el péptido #38 (trans-sialidasa putativa). Estas moléculas fueron utilizadas para caracterizar por citometría de flujo la frecuencia y fenotipo de las células epitope-específicas en las muestras de pacientes. Los resultados preliminares arrojaron frecuencias de células específicas entre 0.09 y 0.46% de los linfocitos T CD4+ o CD8+. Además, el análisis de marcadores fenotípicos mostró un fenotipo de células de memoria central y efectora en las células T CD4+ específicas para el péptido #38. Por su parte, los linfocitos T CD8+, específicos para el epitope mínimo del péptido #47 mostraron predominantemente diferenciación terminal en el análisis ex vivo. No obstante, la estimulación in vitro por 1 semana de CMN del paciente con el péptido en cuestión reveló un enriquecimiento en células específicas con fenotipo de memoria efectora.En conclusión, a pesar de las falencias en la selección de alelos expuestas por la tipificación de HLA en la muestra poblacional, nuestro enfoque predictivo fue exitoso en identificar epítopes capaces de activar una respuesta linfocitaria T de memoria funcional.