Curvas de crecimiento/lisis de aislamientos de Escherichia coli verotoxigénico vt2g-positivos y su relación con citotoxicidad

Abstract

E. coli verotoxigénico (VTEC) puede causar severas enfermedades en humanos como colitis hemorrágica y síndrome urémico hemolítico. El bovino es considerado su principal reservorio. El factor de virulencia más importante de este patógeno es la producción de verotoxinas (VTs), las cuales están codificadas por genes que se encuentran en profagos lamboides insertos en el cromosoma bacteriano y su liberación depende de la lisis bacteriana. Las VTs están clasificadas en dos tipos (VT1, VT2). El grupo VT2 presenta diferentes variantes, entre ellas VT2g. Esta variante fue descripta por primera vez en una cepa VTEC aislada de materia fecal de bovino. Los escasos estudios que se han realizado hasta el momento determinaron que vt2g se encuentra en baja prevalencia en ganado bovino y sugieren que podría ser una variante emergente. El objetivo de este trabajo fue evaluar la inducción del ciclo lítico de bacteriófagos de aislamientos VTEC autóctonos, de origen bovino, a través de la medición de la densidad óptica de cultivos, y su relación con la citotoxicidad.Se analizaron 4 aislamientos VTEC portadores de vt2g (como única variante de verotoxina) pertenecientes a los serotipos O2:H25, O15:H21 y O175:H8 (2 aislamientos). Se construyeron curvas de crecimiento/lisis con los datos de densidad óptica a 600 nm de cultivos incubados a 37ºC y 180 rpm, con y sin inducción con mitomicina C (0,5 ug/ml). Además se construyeron curvas con cultivos de las cepas DH5alfa (como control negativo de lisis por fagos) y EDL933 (como control positivo de lisis por fagos) incubados en las mismas condiciones. Se cuantificó la producción de verotoxinas mediante ELISA (Ridascreen). Los resultados se relacionaron con datos previos de citotoxicidad en células Vero. Las curvas de crecimiento en ausencia de inducción mostraron un patrón similar en los aislamientos. Sin embargo, se observaron 2 patrones de curvas de crecimiento/lisis entre los aislamientos vt2g-positivos post-inducción: A) presentó un pico de crecimiento muy notorio a las 2 hs. y luego una disminución muy marcada de la densidad (aislamientos correspondientes a los serotipos O2:H25 y O15:H21), y B) sin pico de crecimiento marcado y menor disminución de la densidad. La cepa EDL933 inducida presentó un pico de crecimiento no tan marcado, pero sí una notoria disminución de la densidad, mientras que la DHalfa inducida mostró un patrón similar al del cultivo sin inducir pero con menores valores de DO. La cuantificación de verotoxina mediante ELISA mostró mayor título con la cepa del serotipo O2:H25 correspondiente al patrón A que con la correspondiente al perfil B (serotipo O175:H8), datos que correlacionan con los estudios previos de citotoxicidad. Entre los aislamientos vt2g-positivos, la lisis marcada en los cultivos inducidos se correlacionó con una mayor citotoxicidad y una mayor concentración de verotoxina. Las curvas correspondientes al perfil B reflejarían una inducción baja o nula de los fagos portadores de vt2g en estos aislamientos.