Caracterización de Escherichia coli verocitotoxigénica (VTEC) Del serotipo O130:H11 aislada de bovinos de tambos de Argentina

Abstract

Introducción: VTEC es causante de brotes y casos esporádicos de diarrea, colitis hemorrágica (CH) y síndrome urémico hemolítico (SUH)a través de la producción de verocitotoxinas (VT1 y VT2), y factores de virulencia adicionales. Argentina posee la mayor incidencia de SUH a nivel mundial (15,5/100000) en niños menores de 5 años. Los tambos pueden contribuir al riesgo de infección por VTEC a través de la leche y productos lácteos sin pasteurizar. En un estudio realizado en nuestro laboratorio se obtuvo una prevalencia de VTEC del 37, 5% en bovinos lecheros de Argentina y el serotipo aislado con mayor frecuencia fue O130:H11. Éste y otros de los serotipos identificados es ese trabajo, han sido aislados de pacientes con diarrea, CH y SUH en otros estudios. Objetivo: caracterizar geno-fenotípicamente cepas de VTEC del serotipo O130:H11. Materiales y Métodos: 37 cepas del serotipo O130:H11 obtenidas de 5 tambos diferentes fueron caracteriadas. Se determinaron los factores de virulencia (vt1, vt2, ehxA, eae y saa) por PCR multiplex y variantes de vt por PCR y PCR-RFLP. Se realizaron PCR monoplex para los genes crl, csgD y csgA implicados en síntesis de la fimbria curli, y par el gen sab que codifica para una nueva adhesina autotransportada. Además, se determinó el efecto citotóxico en células VERO. Los aislamientos fueron subtipificados mediante MLVA (multiple-locus variable- number tándem-repeat analysis) para lo cual se analizaron por PCR siete loci VNTRs genéricos para E. coli. Se calculó la diversidad genética para cada locus VNTR utilizando el índice de Nei. Resultados: por multiplex PCR se determinó que 36 cepas presentaron un perfil de virulencia: vt1, vt2, saa, ehxA y una cepa el perfil: vt1, saa, ehxA. La variante predominante entre las cepas vt2-positivas fue vt2EDL933. Se presentaron los genotipos vt2EDL933 (27/36), vt2vhb (6/36) y vt2EDL933-vt2vhb (3/36). Las variantes vt2vha, vt2d, vt2NV206 y vt2g no se detectaron entre los aislamientos estudiados. Todas las cepas presentaron efecto citotóxico visible a las 48 h de cultivo. La totalidad de las cepas fueron portadoras de los genes crl, csgD y csgA, mientras que el gen sab se encontró en 23 de 37 cepas. Se encontró un único perfil de MLVA y un locus, el CVN003, mostró alelo nulo. Conclusiones: La presencia de genes de virulencia relacionados con enfermedad en el hombre junto con la observación de efecto citotóxico en células sensibles a la acción de las VTs demuestra el potencial patogénico de aislamientos de este serotipo. La falta de diversidad genética evidenciada por los ensayos de MLVA, podría estar indicando que O130:H11 sería un serotipo emergente.