La actividad opsonizante de los anticuerpos anti-BLSOmp31 promueve la fagocitosis y destrucción de Brucella canis por neutrófilos caninos

Abstract

La inmunización con la proteína BLSOmp31 induce una respuesta humoral significativa en caninos. Dado que la respuesta humoral es importante contra las brucelas rugosas, se diseñó un ensayo para estudiar en caninos: I) la capacidad opsonizante los anticuerpos anti-BLSOmp31 y II) la destrucción de Brucella canis mediada por neutrófilos.Se inmunizaron Beagles con BLSOmp31 adsorbida en Al(OH)3. Para la obtención de los fagocitos se incubó sangre canina heparinizada con 3% Dextran durante 1 hora. Los leucocitos del sobrenadante se suspendieron en tampón fosfato salino y se separaron mediante centrifugación sobre gradiente de Ficoll Hypaque. El pellet se lavó y suspendió en solución de Hanks con Ca++-Mg++ (HBSS). Una suspensión de B. canis RM6/66 en HBSS (1x108 Unidades Formadoras de Colonias (UFC)/ml) y se incubó con 10% de suero inactivado estéril de cada perro (30 min,37°C,en agitación). Luego se incubaron los neutrófilos (1x106células/ml) y las bacterias (1x108UFC/ml) en agitación a 37°C. A los 0, 30 y 75 minutos, se separaron por centrifugación las células del sobrenadante (bacterias extracelulares) y este último se cultivó a 37°C para el recuento de UFC. Posteriormente, se lisaron las células para determinar número de bacterias intracelulares.En concordancia con estudios que demuestran un efecto inhibitorio de Brucella spp. sobre los neutrófilos, no se observó lisis de la bacteria sola u opsonizada con suero control. Si bien hubo variabilidad individual, la evidente disminución de los conteos bacterianos totales (35%-70%) demuestra que los anticuerpos inducidos por BLSOmp31 estimularon la fagocitosis y potenciaron la destrucción efectiva de B. canis.