Detección y cuantificación de plásmidos incp-1 epsilon en suelo rizosférico de Lolium perenne L. luego de la aplicación de estiércoles animales digeridos anaeróbicamente

Abstract

Las diversas producciones agropecuarias que existen en el país generan en conjunto una gran cantidad de residuos, particularmente aquellas de características intensivas. Su manejo adecuado es fundamental en el marco “Una Salud” para atenuar o evitar efectos negativos sobre el ambiente, incluyendo la potencial diseminación de resistencias a antibióticos a través de elementos genéticos móviles. Los desechos pueden ser tratados anaeróbicamente generando un subproducto utilizado como biofertilizante denominado digerido anaeróbico (DA). En este trabajo se evaluó el efecto de la aplicación de un DA derivado de una mezcla de estiércoles de origen variado (producción avícola, porcina y tambo) dentro de un mismo establecimiento, en comparación con urea (46% N) y un control sin agregados, sobre la abundancia de plásmidos de amplio rango de hospedador en suelo rizosférico. Se utilizó raigrás perenne (Lolium perenne L.) como modelo de estudio. El ensayo se llevó a cabo en invernáculo bajo un diseño completamente aleatorizado con un suelo sin historia deenmiendas (0-20 cm, textura: franca, tipo de suelo: Paleustol petrocálcico) y 5 réplicas portratamiento (n=5). Se realizaron 3 cortes de la biomasa aérea (25, 42 y 58 días post-siembra)simulando eventos de pastoreo. En los tratamientos fertilizados se utilizó la misma dosis de N (106,33 mg N-NH4 kg suelo-1, equivalente a 140 kg N ha-1), fraccionada en tres aplicaciones (3 días pre-siembra, 25 y 42 días post-siembra). Al momento del tercer corte se realizó el muestreo del suelo rizosférico y se extrajo el ADN metagenómico mediante el kit comercial ADN Puriprep Soil kit (Inbio Highway, Tandil, Argentina). Mediante PCR cuantitativa se determinó la abundancia absoluta del gen trfA con cebadores específicos para el subgrupo ε de plásmidos IncP-1, reconocidos como vectores de diversos genes de resistencia en agroecosistemas. El análisis estadístico se realizó mediante ANOVA de un factor (α = 0,05). Los resultados obtenidos indicaron la detección específica del gen en todos los tratamientos (Eficiencia = 97,98%, R2 = 0,994, límite de cuantificación = 61 copias). Si bien el gen trfA fue detectado también en el ADN del DA, no se observó un efecto del tratamiento: la fertilización con DA no mostró diferencias significativas en la abundancia del gen trfA respecto de la urea y del control sin fertilizar. Estudios posteriores deberándeterminar qué ocurre frente a aplicaciones repetidas de largo plazo para determinar si lasaplicaciones de digerido podrían favorecer su diseminación en la cadena agroalimentaria.