Influencia del locus de adherencia y autoagregación (LAA) de cepas Escherichia coli productor de toxina Shiga en la adherencia a células HEp-2

Abstract

Escherichia coli productor de toxina Shiga (STEC) es considerado un patógeno emergente transmitido por alimentos asociado a colitis hemorrágica (CH) y Síndrome Urémico Hemolítico (SUH). Dentro de STEC existe un grupo que coloniza y lesiona la mucosa intestinal debido a una isla de patogenicidad llamada Locus de borrado del enterocito (LEE). A partir de la presencia o ausencia de este locus se podría realizar una clasificación de STEC en LEE-positivas o LEE-negativas. Las cepas LEE-negativas no poseen los genes necesarios para producir lesión. Sin el locus LEE, las cepas deben adherirse al epitelio intestinal por otros mecanismos. Se ha determinado la existencia de una isla de patogenicidad denominada LAA que en ausencia de LEE, codifica genes que participan en la adhesión y autoagregación. Su marcador es el gen hes, que se encuentra en uno de los cuatro módulos que la componen y participaría en los mecanismos de patogenicidad. El objetivo de este trabajo fue estudiar la adherencia de cepas STEC LAA-positivas a la línea celular HEp-2. Se trabajó con un total de 16 cepas STEC O91 de la cuales 14 fueron autóctonas LAA-positivas y dos mutantes, una O91 con la deleción de LAA (O91∆LAA) y una HB101 con la inserción de un plásmido recombinante con el gen hes (HB101pvbhes). Cada cepa se incubó en caldo Luria Bertani (LB) (18 h, 37°C). Se trabajó con la línea celular HEp-2. Las células se cultivaron en placas de 24 pocillos. Posteriormente, se sembraron por duplicado 100 μl de una suspensión de cada cepa y se incubaron durante 3 h a 37°C en una atmósfera de 5% CO2. Para recuperar las células con las bacterias adheridas se agregó a cada pocillo 200 μl de Tripsina-EDTA y se incubó 10 minutos a 37°C. Se lavó 2 veces con 400 μl de PBS estéril y se recuperó todo el volumen del lavado que se sembró en placas de Agar Mc Conckey. Se realizó el recuento de UFC que indica el número de bacterias adheridas a las células HEp-2. Las cepas O91 LAA-positivas mostraron mayor número de bacterias adheridas a la línea celular, aunque con variaciones en el número entre cada aislamiento, que la mutante carente de LAA, y la cepa HB101pvbhes. Las diferencias individuales pueden deberse a la presencia de múltiples adhesinas, codificadas fuera de LAA. Estos resultados permitirían confirmar la función de adherencia de esta novel isla de patogenicidad LAA, de importancia en cepas carentes de LEE.