Modulación de la expresión de los TLR3 y 7 en células neurales infectadas con alfaherpesvirus bovinos

Abstract

El alfaherpesvirus bovino (BoAHV)-5 es el agente causal de meningoencefalitis en terneros, mientras que ocasionalmente BoAHV-1 puede asociarse a cuadros neurológicos. La expresión de los receptores tipo toll (TLR) en tejido nervioso de terneros infectados experimentalmente con alfaherpesvirus bovino (BoAHV)-1 y -5 demostró que los TLR 3 y 7 desempeñan un rol importante en la respuesta a estas infecciones. El objetivo de este estudio fue determinar la expresión de los TLR 3 y 7 y su relación con la replicación de BoAHV-1 y -5 en células neurales estimuladas con agonistas de dichos receptores. Monocapas de células de nueroblastoma humano (SH-SY5Y) se estimularon con PolyI:C e imiquimod (agonistas de TLR 3 y 7, respectivamente) e infectaron a una moi=1 con las cepas Cooper (BoAHV-1), 97/613 (BoAHV-5) y A663 (recombinante natural BoAHV-1 y -5). El ARN se extrajo a las 6 y 24 hpi. La expresión del mRNA de los TLR 3 y 7 se cuantificó por RT-qPCR. En células infectadas con la cepa Cooper se observó un incremento en la expresión de los TLR 3 y 7 durante toda la infección (p≤0,05) con respecto al control sin infectar, mientras que la expresión del TLR 3 se inhibió durante toda la infección con la cepa 97/613. Por otro lado, se detectó una inhibición de la expresión del TLR7 a las 6hpi y un aumento con respecto al control a las 24hpi (p≤0,05), Cuando las células fueron infectadas con el recombinante natural A663 se observó un aumento progresivo en los niveles de ARNm de TLR7 a lo largo de la infección. En las células tratadas con imiquimod se redujeron los títulos de BoAHV-1 en las primeras horas de la infección en comparación a las células infectadas sin tratamiento, mientras que el tratamiento con los agonistas de los TLR disminuyó la replicación de BoAHV-5 a las 24hpi (p≤0,05). En las células infectadas con A663 y tratadas con imiquimod se observó una reducción de los títulos virales a lo largo de toda la infección. El aumento en la replicación de BoAHV-1 y el recombinante natural A663 promueve la expresión del TLR7 a lo largo de la infección. La activación del TLR 7 induce la expresión del IFN-α, el cual disminuye la replicación de la cepa Cooper de BoAHV-1 y el recombinante natural A663 en comparación a las células infectadas con BoAHV-5 que alcanzaron mayor título en la células neurales. En las células infectadas con BoAHV-1 aumenta significativamente la expresión de TLR3 a lo largo de la infección, mientras que BoAHV-5 inhibe la expresión del TLR 3 en ambos horarios. La activación de este receptor estimula los procesos apoptóticos en las células infectadas. En este caso, la disminución en la expresión de TLR 3 podría disminuir estos procesos en las células infectadas garantizando la replicación del virus. Esta diferencia en la interacción con los TLR 3 y 7 durante la infección con BoAHV-1 y BoAHV-5 podría explicar en parte las diferencias en la neuropatogenia de estos alfaherpesvirus.