Análisis molecular de hipotiroidismos por defecto en la biosíntesis de tiroglobulina. Identificacion y caracterización de sitios crípticos de splicing en el gen de la tiroglobulina humana

Abstract

La tiroglobulina (TG) es una glicoproteína homodimérica de 660 kDa secretada por el tirocito a la luz folicular, donde funciona como matriz para la biosíntesis de hormonas tiroideas. Es codificada por un gen de copia única, de 270 kb que mapea en el cromosoma 8q. Mutaciones en el gen de la TG producen bocio congénito con hipotiroidismo originando fenotipos variables. El objetivo de este trabajo es analizar nuevos mecanismos moleculares implicados en el desarrollo de los mismos. Se secuenciaron los 48 exones del gen de la TG de cuatro pacientes con hipotiroidismo y defecto de la TG. Se identificaron 6 nuevas mutaciónes (g-IVS6+1G>A, p.Q717X, p.S1203L, p.I1244fsX1246, p.R1251C, g.IVS19+3_4delAT) y 1 mutación previamente identificada (p.R277X), constituyendo 3 nuevos compuestos heterocigotas: p.R277X/p.Q717X, p.I1244fsX1246/g.IVS19+3_4delAT y g.IVS6+1G>A/p.S1203L/p.R1251C. Se construyeron minigenes para el estudio de los efectos de las mutaciones g.IVS6+1G>A y g.IVS19+3_+4delAT. La transcripción "in vitro" muestra que el exón 6 es excluido parcialmente o por completo cuando la mutación g.IVS6+1G>A está presente. La exclusión del exón 6 entero predice una proteína de 200 aminoácidos con un cambio del marco de lectura y un codón de terminación prematuro (CTP) en el exón 7. La retención parcial del exón 6 predice una proteína de 382 aminoácidos con un cambio de marco de lectura y un CTP en el exón 9. Por otra parte, el análisis del minigen que contiene la mutación g.IVS19+3_+4delAT incluye solo los primeros 57 nucleótidos del exón 19, originando un CTP en el exón 20. En conclusión, el presente trabajo permitió comprender los defectos estructurales y funcionales de las proteínas mutadas contribuyendo a su vez al conocimiento básico de la maquinaria de "splicing" de la TG. Adicionalmente y por primera vez se identificaron mutaciones inactivantes de la TG (p.I1244fsX1246/g.IVS19+3_4delAT) en un hipotiroidismo con tiroides de tamaño y posición normal.