Extracción y evaluación de la calidad de ARN de muestras almacenadas a largo plazo provenientes de intestinos y riñones de pez cebra (Danio rerio) tratado con y sin probióticos

Abstract

El ARN de alta calidad es fundamental para muchos estudios de investigación, pero uno de los principales problemas que afectan la integridad del ARN es la presencia ubicua de RNasas, enzimas resistentes que lo degradan rápidamente. Contar con un procedimiento confiable de conservación de las muestras es esencial. A partir de un ensayo que evaluó el efecto de tres cepas probióticas en pez cebra se realizó la extracción del ARN total de los intestinos y riñones de los peces tratados y controles. Objetivo: evaluar la calidad del ARN total extraído a partir de intestinos y riñones de pez cebra luego del almacenamiento a largo plazo. Se extrajeron los intestinos y riñones, que fueron almacenados de dos maneras diferentes. Tres intestinos y 3 riñones de cada pecera fueron almacenados en N2 líquido y otros 3 de cada uno fueron sumergidos en RNAlater por 24 h. Luego todas las muestras fueron conservadas a -80ºC por 7 años. El ARN total se extrajo con un kit comercial y homogeneizador. La calidad de ARN extraído se evaluó mediante un gel de agarosa al 1,5% teñido con el colorante DiamondTM (Promega). Las muestras de ARN extraídas a partir de los intestinos de manera individual y las de riñones extraídas a partir de pooles de 3, presentaron las 2 bandas características del ARN ribosomal. La conservación de tejido en RNAlater y el congelado en N2 líquido y posterior almacenamiento a -80ºC, fueron adecuados para preservar a largo plazo el ARN total de alta calidad.