Efecto de la presencia de un inhibidor de la producción de especies reactivas de oxígeno en células neurales SH-SY5Y infectadas con alfaherpesvirus bovinos

Abstract

Los alfaherpesvirus bovinos tipo 1 y 5 (BoAHV-1 y BoAHV-5) son virus estrechamente relacionados. Aunque ambas especies virales son neurotrópicas, BoAHV-5 es el agente causal de meningoencefalitis necrotizante no supurativa en terneros mientras que BoAHV-1 solo ocasionalmente causa encefalitis. Actualmente no están establecidos qué mecanismos del hospedador y/o virus determinan las diferencias en neuropatogenicidad entre ambos virus. El oxígeno es fundamental para el correcto funcionamiento del cerebro, está involucrado en la transducción de señales, transcripción de genes y otras actividades celulares, aunque también posee un efecto adverso debido a su estado de reducción metabólica que deriva en la formación de especies reactivas de oxígeno (ROS). El objetivo de este estudio fue evaluar si existen diferencias en la producción de ROS en células neurales SH-SY5Y infectadas con diferentes cepas de BoAHV. Para ello se utilizaron células neurales no diferenciadas y diferenciadas con ácido retinoico (RA) [10 µM] por 5 días y pre-tratadas por 1 h con N-Acetil-L-Cisteína (NAC), un tiol que se utiliza como antioxidante [5 mM]. Las infecciones se realizaron a una MOI=1 por 1 a 4 y 24 h en placas de 96 pocillos. La producción de ROS se cuantificó mediante el uso de la sonda CellRox y la lectura se realizó en lector de microplaca. Se observó una diferencia significativa en la producción de ROS entre BoAHV-1 y 5 (p<0,05) a las 4 hpi en células diferenciadas y 3 hpi en células sin diferenciar. En los horarios restantes, no se observaron diferencias estadísticamente significativas en la producción de ROS entre las distintas cepas (p>0,05), incluso, a las 24 hpi la producción de ROS entre ambas especies virales se mantiene en los mismos niveles que el control negativo, tanto en células diferenciadas como sin diferenciar. Si bien estos resultados sugieren que la producción de ROS entre las infecciones con BoAHV-1 y BoAHV-5 no varía en estas células neurales, tal producción sigue siendo mayor en células infectadas que en células sin infectar pre-tratadas con NAC.