La expresión de NF-kB en cultivos de células neurales y renales infectadas con el alfaherpesvirus bovino-1 y tratadas con fosfomicina es dependiente del tipo celular

Abstract

El alfaherpesvirus bovino-1 (BoAHV-1), miembro del complejo respiratorio bovino, puede predisponer al ganado a infecciones bacterianas secundarias, estando la fosfomicina (FOS), indicada en estos casos. Se trata de un antibiótico de amplio espectro que en humanos ha mostrado suprimir la actividad del NF-κB, molécula proteica con rol clave en la regulación de la respuesta inmune y proinflamatoria y. El objetivo de este estudio fue determinar en células SH-SY5Y (neurales humanas) y MDBK (renales bovinas), si la infección por BoAHV-1 (moi=0,1) y el tratamiento con FOS cálcica (580 μg/mL) modulan la expresión de NF-kB. A tal fin, a las 4 hs post-infección con BoAHV-1, se recolectaron células neurales y renales tratadas y no tratadas con FOS y se evaluaron los niveles de ARNm de NF-kB. Se extrajo el ARN total con TRIzol, y se determinó su concentración y pureza mediante espectrofotómetro. Se sintetizó el ADNc y se realizó la técnica de qPCR. Se utilizaron cebadores específicos para la amplificación del ARNm de NF-kB humano y bovino y se utilizó gliceraldehído-3-fosfato deshidrogenasa (GAPDH) humano y bovino como genes endógenos. La amplificación y detección de productos específicos se efectuó mediante QuantStudio 5, en las siguientes condiciones: 2 min a 50ºC, 10 min a 95ºC, 40 ciclos de 15 s a 95ºC y 60 s a 60ºC. En todos los casos se incluyeron controles negativos (sin transcriptasa reversa) para la síntesis de ADNc. Los niveles de ARNm de NF-κB en células infectadas con BoAHV-1 fueron similares para las células SH-SY5Y tratadas con FOS y las no tratadas (p≥0,05). Sin embargo, en las células MDBK, la transcripción de NFkB fue menor (12,8 veces) en células tratadas con FOS (p≥0,05). La supresión de la respuesta proinflamatoria asociada a la activación de NF-κB en células de origen bovino podría contribuir a reducir la respuesta inflamatoria observada en enfermedades respiratorias virales u otras condiciones clínicas. Como muchas otras propiedades de FOS, este hallazgo también parece depender del tipo celular, por lo que se requieren estudios futuros para dilucidar mejor el efecto de la FOS en la respuesta inmune y proinflamatoria.