Estandarización de un ELISA para detección de anticuerpos contra el virus de hepatitis E (VHE) en porcinos: resultados preliminares

Abstract

El virus de la hepatitis E (VHE) es un patógeno emergenteen humanos en países industrializados. El genotipo 3 delVHE, de distribución mundial y el más frecuentementeencontrado en América Latina, es de carácter zoonótico,siendo el cerdo doméstico y el cerdo asilvestrado losprincipales reservorios. El porcino no enferma perotransmite el VHE al hombre, quien adquiere la infección porexposición ocupacional, consumo de carne mal cocida, opor ingestión de agua contaminada con materia fecal deanimales infectados. El objetivo del presente trabajo fueestandarizar un ELISA indirecto para detectar IgG anti-VHEen muestras de suero porcino, que nos permita estudiar laseroprevalencia y epidemiología de la infección. Se utilizócomo antígeno un polipéptido de 66 kDa de la proteínade la cápside del VHE producido en forma recombinante,adsorbido a microplacas de poliestireno. Para la detección delos anticuerpos específicos se utilizó un anticuerpo anti-IgGporcina conjugado a peroxidasa y TMB/H2O2. Para definir las condiciones óptimas del ensayo utilizamos un panel de54 muestras positivas y 70 negativas, analizadas medianteun ensayo de tercera generación: HEV Ab, Versión ULTRA(DIA.PRO, Italia). Se ensayaron distintas concentraciones deantígeno adsorbido, dilución del suero y del conjugado. Encada placa se incluyeron 3 controles positivos con diferentegrado de reactividad y varios sueros negativos. Para cadamuestra se determinó la relación de A450nm/promedioA450nm de controles negativos (A450nm muestra/CN) y serealizó un análisis ROC (receiver operating characteristic)utilizando Epitools, versión 1.0.9, 2022. El área bajo la curvaresultó 0,985 (IC 95% 0,97-0,999). Para un valor de corte de2,14 (A450nm muestra/CN) la sensibilidad y especificidadrelativas a la técnica utilizada como referencia fueron 0,926y 0,943, respectivamente. El ensayo es menos sensible quela prueba de referencia, no obstante, resulta apropiado parainvestigar la epidemiología de la infección.